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2型豬鏈球菌Al-2合成酶LuxS的功能鑒定及其在毒力中的作用

發(fā)布時間:2020-12-08 19:48
  2型豬鏈球菌(Streptococcus suis serotype2, SS2)是一種重要的人畜共患病病原體,不僅可感染豬導(dǎo)致腦膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎、敗血癥等,甚至可以致急性死亡,每年給全球養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟損失;偶爾也可通過傷口、呼吸道等途徑感染人,患者臨床表現(xiàn)為腦膜炎、敗血癥等疾病,但多為散發(fā),預(yù)后較好。值得關(guān)注的是我國在1998和2005年分別暴發(fā)兩起SS2同時大規(guī)模感染豬和人的公共衛(wèi)生事件,而且有大約1/3的病人出現(xiàn)中毒性休克綜合征(TSS)的臨床表現(xiàn),這類病人病情發(fā)展快,病程兇險,病死率高達62.7%81.3%。我們課題組對于這一情況進行了全面研究,國內(nèi)外首次報道SS2感染引起新的臨床病型——鏈球菌中毒性休克綜合征(streptococcal toxic shock syndrome,STSS),認為SS2的感染宿主范圍和致病性都發(fā)生重大變化,流行菌株可能發(fā)生毒力變異,文章發(fā)表后引起國內(nèi)外學術(shù)界的廣泛關(guān)注。隨后,我們對兩次流行的代表菌株98HAH12和05ZYH33進行了全基因組測序和組功能注釋,結(jié)果發(fā)現(xiàn)引發(fā)兩次大流行的SS2強毒株基因組中均帶有一段89... 

【文章來源】:中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】:136 頁

【學位級別】:博士

【部分圖文】:

2型豬鏈球菌Al-2合成酶LuxS的功能鑒定及其在毒力中的作用


可知,05ZYH33中的LuxS與無乳鏈球菌中的相應(yīng)蛋白

原核表達,細菌,重組質(zhì)粒,蛋白


圖 1.3 luxS 基因的原核表達A:pET32a- luxS 重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果 (1 重組質(zhì)粒的 PCR 鑒定;2 從基因組 PCR 擴增該片3 BamHI/ EcoRI 雙酶切鑒定重組質(zhì)粒;4 未酶切重組質(zhì)粒;M:1KbMarker)B:SDS-PAGE 檢測 luxs 重組蛋白的表達(M 預(yù)染蛋白 Marker;1.誘導(dǎo)的 pET32a 質(zhì)粒菌 .;2G 誘導(dǎo)后的 pET32a- luxS 轉(zhuǎn)化菌)4.討論LuxS 蛋白家族是廣泛存在于革蘭陽性和陰性菌中的一種保守蛋白,其中既有致病、條件機會致病菌也有共生細菌。我們已經(jīng)知道 LuxS 蛋白既可能在 AI-2 介導(dǎo) QS調(diào)節(jié)細菌多種功能,又同時也是維持代謝平衡的重要代謝酶。鑒于其在細菌中的重作用,其基因特征、結(jié)構(gòu)、功能等方面的研究引起各國學者的廣泛關(guān)注。近些年,有超過 80 種細菌中報道存在 luxS 同源物,至少有 5 種細菌(幽門螺旋桿菌,嗜血流菌,耐輻射球菌,精細芽孢桿菌和變形鏈球菌)中的 LuxS 蛋白獲得了晶體結(jié)構(gòu)并進行

片段,抗性基因,引物,PCR擴增


第三軍醫(yī)大學博士學位論文載體的構(gòu)建05ZYH33的基因組DNA為模板,用引物對LA段LA (1,068 bp),用引物對RA1/RA2 擴增得到時用引物對Spc1/Spc2 從pSET2 質(zhì)粒中擴增得R 產(chǎn)物的電泳結(jié)果如圖 2.1 所示。

【參考文獻】:
期刊論文
[1]豬鏈球菌2型唾液酸合成酶neu B基因敲除突變株的構(gòu)建及其生物學特性[J]. 董瑞萍,王長軍,程功,李明,王晶,潘秀珍,唐家琪.  微生物學通報. 2009(02)
[2]環(huán)境條件對豬鏈球菌2型電轉(zhuǎn)化效率的影響[J]. 李明,胡福泉,王長軍,鄭峰,董亞青,潘秀珍,唐家琪.  中國人獸共患病學報. 2007(08)
[3]ΔLuxS的表型分析及其在GBS毒力調(diào)控機制研究中的應(yīng)用[J]. 歐陽謙,馬文麗,劉翠華,石嶸,鄭文嶺.  南方醫(yī)科大學學報. 2006(01)
[4]微生物嗜鐵素介導(dǎo)的鐵攝取[J]. 王偉,肖明.  生物學雜志. 2005(04)
[5]一起豬鏈球菌病暴發(fā)流行的流行病學及病原學研究[J]. 朱進,唐家琪,郭恒彬,張云,陶開華.  解放軍預(yù)防醫(yī)學雜志. 2000(04)



本文編號:2905590

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