發(fā)布時間：2024-06-02 17:55

　　近年來,關于群體感應(quorum sensing, QS)系統(tǒng)介導病原微生物致病機理等方面的研究比較多,而群體感應系統(tǒng)介導益生菌,特別是乳桿菌在抑菌效果、黏附性、耐酸性及在動物消化道中的定植等益生特性方面的研究比較少,并且AI-2/LuxS群體感應系統(tǒng)介導乳桿菌對膽鹽的耐受、調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡以及對機體的免疫調(diào)節(jié)等益生特性還未見報道。基于當前的研究現(xiàn)狀,本課題研究群體感應系統(tǒng)介導植物乳桿菌AY01和植物乳桿菌YM4-3的生長特性、抑菌性、luxS基因表達、耐酸耐膽鹽并對植物乳桿菌群體感應luxS基因進行敲除。乳酸菌(Lactic acid bacteria, LAB)是指在發(fā)酵過程中能夠利用碳水化合物進行發(fā)酵,產(chǎn)生以乳酸為主要發(fā)酵產(chǎn)物的一群細菌；它不是微生物分類學上的名稱,只是一種慣用叫法。乳酸菌的分布非常廣泛,在生物體和自然環(huán)境中均有分布,如：人和動物的消化系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、糞便；并且發(fā)酵動植物食品和飲料、植物體、土壤、淤泥和污水中均有乳酸菌分布。乳桿菌(Lactobacillus)是乳酸菌(LAB)最大的一個屬,因其形態(tài)呈桿狀以及能發(fā)酵碳水化合物(主要為葡萄糖)并產(chǎn)生大量乳酸而...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 種內(nèi)的群體感應系統(tǒng)
        1.2.1 革蘭氏陰性細菌群體感應系統(tǒng)
        1.2.2 革蘭氏陽性細菌群體感應系統(tǒng)
    1.3 種間信號感應系統(tǒng)
        1.3.1 自誘導-2(AI-2)概述
        1.3.2 擴散信號因子(Diffusible signal factor,DSF)概述
    1.4 乳桿菌概述
    1.5 乳酸桿菌AI-2/LuxS群體感應系統(tǒng)介導的益生特性研究進展
        1.5.1 乳酸桿菌AI-2/LuxS群體感應系統(tǒng)介導的抑菌特性研究
        1.5.2 乳桿菌AI-2/LuxS群體感應系統(tǒng)介導的耐酸特性研究
        1.5.3 乳桿菌AI-2/LuxS群體感應系統(tǒng)介導的腸道黏附和生物膜形成
        1.5.4 乳桿菌AI-2/LuxS群體感應系統(tǒng)介導的動物消化道定植
    2 問題與展望
    3. 研究的目的及意義
第二章 群體感應介導的植物乳桿菌益生特性
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗菌株
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基及試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 生長曲線和產(chǎn)酸試驗
        2.2.2 抑菌試驗
        2.2.3 生長階段luxS基因表達分析
        2.2.4 植物乳桿菌的酸耐受性研究
        2.2.5 植物乳桿菌耐膽鹽研究
    2.3 實驗結果與分析
        2.3.1 植物乳桿菌生長和產(chǎn)酸曲線繪制
        2.3.2 抑菌實驗結果與分析
        2.3.3 生長階段luxS基因表達分析
        2.3.4 植物乳桿菌耐酸特性結果
        2.3.5 耐膽鹽研究結果
    2.4 本章小結
第三章 植物乳桿菌luxS基因功能研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌種及質粒
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 工具酶與試劑盒
        3.1.4 培養(yǎng)基
        3.1.5 試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 引物設計
        3.2.2 植物乳桿菌AY01和植物乳桿菌YM 4-3的基因組抽提
        3.2.3 基因的PCR擴增以及序列分析
        3.2.4. 非溫度敏感性質粒構建
        3.2.5 溫度敏感性質粒構建
        3.2.6 基因敲除載體轉化進入植物乳桿菌
    3.3 實驗結果
        3.3.1 植物乳桿菌AY01和YM4-3基因組提取及PCR擴增產(chǎn)物
        3.3.2 植物乳桿菌AY01和YM4-3luxS基因的序列分析
        3.3.3 植物乳桿菌基因敲除載體的構建
        3.3.4 植物乳桿菌YM4-3luxS基因敲除載體pKML01構建
        3.3.5 植物乳桿菌YM4-3luxS基因敲除載體pKML02構建
        3.3.6 植物乳桿菌AY01luxS基因敲除載體pKML05構建
        3.3.7 植物乳桿菌luxS基因敲除
    3.4 本章小結
第四章 總結
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄
致謝
參考文獻
附錄A 本實驗所用質粒圖譜



本文編號：3987596