發(fā)布時(shí)間：2020-10-16 18:05

　　 一氧化氮 (NO)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型植物信號(hào)分子。以硝普鈉 (Sodiumnitroprusside ,SNP)為一氧化氮 (NO)的供體 ,研究外源NO對(duì)金絲桃懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)及金絲桃素生物合成的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明 ,金絲桃懸浮細(xì)胞在含 0 5和 15 0mmol LSNP的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2 0d后 ,細(xì)胞的干重分別為對(duì)照組的 14 0 %和 5 0 % ;細(xì)胞中金絲桃素的含量分別為對(duì)照組的 98%和2 10 %。試驗(yàn)結(jié)果表明 ,低濃度SNP處理有利于金絲桃懸浮細(xì)胞生長(zhǎng) ,而高濃度SNP可以促進(jìn)金絲桃素的合成。在細(xì)胞培養(yǎng)初期 (0d)加入 0 5mmol LSNP并在指數(shù)生長(zhǎng)后期 (1
【部分圖文】：

在細(xì)胞接種前分別向培養(yǎng)基中添加0·5、15·0mmol/L的SNP和20mmol/L的NO淬滅劑CPI-TO,考察不同濃度的NO對(duì)金絲桃懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,結(jié)果見(jiàn)圖1。試驗(yàn)結(jié)果表明,低濃度的SNP(0·5mmol/L)對(duì)金絲桃懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用,表現(xiàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)的延滯期縮短;細(xì)胞生長(zhǎng)速率和細(xì)胞干重大于對(duì)照(圖1)。高濃度SNP(15·0mmol/L)對(duì)金絲桃懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)則具有明顯的抑制作用。CPITO(2-4-carboxyphenyl-4,4,5,5-tetra-methylimidazoline-1-oxyl-3-oxide)能夠快速并且專(zhuān)一地與NO反應(yīng),是一種常用的NO淬滅劑[15,16]。為了進(jìn)一步驗(yàn)證添加SNP對(duì)金絲桃懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響是否確實(shí)由其分解產(chǎn)物NO引起,在添加不同濃度SNP的同時(shí)加入了20mmol/L的CPITO。試驗(yàn)結(jié)果表明,在CPITO存在的情況下,添加15·0mmol/L SNP不影響金絲桃懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)(圖1),說(shuō)明SNP是通過(guò)其分解產(chǎn)物NO影響金絲桃懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)。

在添加不同濃度SNP培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的金絲桃細(xì)胞中金絲桃素含量的變化情況如圖2所示。培養(yǎng)基中添加15·0mmol/L的SNP可以顯著提高單位重量金絲桃細(xì)胞中的金絲桃素含量,而添加0·5mmol/L的SNP對(duì)金絲桃細(xì)胞中金絲桃素的含量無(wú)影響。試驗(yàn)結(jié)果同時(shí)表明,在CPITO存在的情況下,添加15·0mmol/L的SNP不影響金絲桃懸浮細(xì)胞中金絲桃素的含量(圖2),表明SNP是通過(guò)其分解產(chǎn)物NO促進(jìn)金絲桃懸浮細(xì)胞中金絲桃素的合成。

金絲桃素是金絲桃植物中的黃酮甙類(lèi)化合物[17]。苯丙烷代謝途徑是金絲桃素等黃酮類(lèi)次生代謝物質(zhì)生物合成的共同途徑,苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苯丙烷代謝途徑的主要關(guān)鍵酶之一[21]。本文考查了不同濃度SNP對(duì)金絲桃懸浮細(xì)胞中PAL活性的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3。與對(duì)照相比,添加高濃度SNP(15·0mmol/L)可以顯著提高金絲桃懸浮細(xì)胞中PAL活性(圖3)。在15·0mmol/L的SNP處理30min后,金絲桃細(xì)胞中PAL活性開(kāi)始出現(xiàn)增加,并且在第8~9天時(shí)達(dá)到最高,比相同培養(yǎng)時(shí)期的對(duì)照細(xì)胞中的PAL活性高出4倍多(圖3)。SNP對(duì)金絲桃懸浮細(xì)胞中PAL活性的促進(jìn)作用亦可被CPITO所抑制(圖3),說(shuō)明SNP也是通過(guò)其分解產(chǎn)物NO影響細(xì)胞中PAL活性的。
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