發(fā)布時(shí)間：2024-06-29 20:21

　　免疫系統(tǒng)包括先天免疫和適應(yīng)性免疫,無脊椎動(dòng)物只有先天免疫。雖然在屬于無脊椎動(dòng)物的模式生物果蠅中,有關(guān)先天免疫研究的比較清楚,但是在海洋無脊椎動(dòng)物中的研究有待投入更多的精力。本文以海洋無脊椎動(dòng)物,日本囊對蝦為研究對象,對其模式識(shí)別和免疫相關(guān)信號途徑進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)L型凝集素可能做為一種調(diào)理素輔助血細(xì)胞進(jìn)行吞噬作用；Toll和IMD信號通路參與抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的免疫應(yīng)答,并且發(fā)現(xiàn)同一個(gè)抗菌肽可以受這兩條信號通路的調(diào)控。 (1)日本囊對蝦的一種L型凝集素促進(jìn)血細(xì)胞對病原菌的吞噬作用能力 L型凝集素(L-Type Lectin, LTLs)含有糖類識(shí)別結(jié)構(gòu)域,與來源于豆科植物種子的凝集素在結(jié)構(gòu)上的折疊方式相似。這是一類I型跨膜蛋白,在動(dòng)物中LTLs主要參與了蛋白的分泌過程,與糖蛋白的篩選、轉(zhuǎn)運(yùn)和靶向運(yùn)輸有關(guān)。最近有研究表明LTLs可能參與了脊椎動(dòng)物的免疫應(yīng)答,但在無脊椎動(dòng)物先天免疫中的功能尚未見報(bào)道。我們從日本囊對蝦(Marsupenaeus japonicus)中發(fā)現(xiàn)了一種L型凝集素并命名為MjLTL1,它含有一個(gè)信號肽、一個(gè)L型凝集素結(jié)構(gòu)域和一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。在鰻弧菌感染的對蝦血...

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
符號說明
第一章 綜述 無脊椎動(dòng)物的先天免疫
    一、無脊椎動(dòng)物的先天免疫系統(tǒng)
        1. 物理防御
        2. 細(xì)胞免疫
        3. 體液免疫
    二、無脊椎動(dòng)物的免疫相關(guān)信號通路
        1. Toll信號途徑
        2. IMD信號途徑
        3. JAK/STAT信號途徑
        4. JNK信號途徑
        5. 信號通路之間存在協(xié)作
    三、L型凝集素
        1. L型凝集素的發(fā)現(xiàn)
        2. L型凝集素的結(jié)構(gòu)
        3. L型凝集素的功能
    四、本研究的目的意義和技術(shù)路線
第二章 日本對蝦L型凝集素提高血細(xì)胞對病原菌的吞噬能力
    一、前言
    二、材料與方法
        1. 試劑、儀器、載體和菌株
        2. 對蝦的免疫刺激和總RNA的提取
        3. MjLTL1 and MjADAM的cDNA克隆
        4. MjLTL1和MjADAM系統(tǒng)發(fā)育分析
        5. 實(shí)時(shí)定量PCR(qRT--PCR)分析MjLTL1和MjADAM的組織分布
        6. 蝦體感染弧菌后的MjLTL1和MjADAM時(shí)空表達(dá)模式
        7. rMjLTL1和PET30A在大腸桿菌中重組表達(dá)與純化
        8. MjLTL1多克隆抗體的制備和western blot檢測
        9. 細(xì)菌凝集實(shí)驗(yàn)
        10. 細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        11. 糖結(jié)合實(shí)驗(yàn)
        12. 細(xì)菌清除實(shí)驗(yàn)
        13. RNA干擾(RNAi)實(shí)驗(yàn)
        14 鰻弧菌的熒光標(biāo)記和吞噬實(shí)驗(yàn)
    三、結(jié)果
        1. MjLTL1全長cDNA克隆和MjLTL1、MjADAM進(jìn)化樹的構(gòu)建
        2. MjLTL1和MjADAM在弧菌感染的蝦體中表達(dá)上調(diào)
        3. 重組表達(dá)的MjLTL1具有凝集細(xì)菌的能力
        4. rMjLTL1能夠結(jié)合不同的細(xì)菌和多種多糖
        5. MjLTL1能夠促進(jìn)弧菌的清除
        6. 注射rMjLTL1提高了血細(xì)胞對弧菌的吞噬效率,干擾掉MjLTL1或者M(jìn)jADAM使對蝦血細(xì)胞吞噬細(xì)菌的效率降低
    四、討論
第三章 Toll和IMD信號通路調(diào)控抗菌肽表達(dá)的機(jī)制研究
    一、前言
    二、材料與方法
        1. 試劑、儀器、載體和菌株
        2. 細(xì)菌的感染和總RNA的提取
        3. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD進(jìn)化樹的構(gòu)建和同源比對
        4. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD的組織分布和表達(dá)模式
        5. 對蝦受S.aureus和V. anguillarum感染后抗菌肽的表達(dá)模式
        6. RNA干擾實(shí)驗(yàn)
    三、結(jié)果與分析
        1. 序列信息分析
        2. MjDorsal、MjRelish、MjMyD88和MjIMD的組織分布和表達(dá)模式
        3. 抗菌肽的在對蝦感染V. anguillarum和S.aureus后的表達(dá)模式
        4. RNA干擾實(shí)驗(yàn)
    四、討論
創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)
    1. L型凝集素
    2. Toll和IMD信號通路
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3997872