發(fā)布時間：2024-09-28 16:09

　　香港牡蠣(Crassostrea hongkongensis)隸屬軟體動物門(Mollusca)、瓣鰓綱(Lamellibranchia)、翼形亞綱(Pterimorpjia)、珍珠目(Pterioida)、牡蠣科(Ostreidae)、巨蠣屬(Crassostrea),缺乏適應(yīng)性免疫系統(tǒng),主要依靠先天免疫系統(tǒng)抵抗外界病原的侵染,其中血淋巴的吞噬作用在清除病原過程中發(fā)揮著核心作用。本研究通過RACE、q RT-PCR、亞細(xì)胞定位、原核表達(dá)、血細(xì)胞計數(shù)、Edu增殖測定等手段,對香港牡蠣淋巴因子Tal進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析,探討它們在香港牡蠣免疫防御過程中的作用。研究結(jié)果表明:1.香港牡蠣Tal基因的克隆與生物信息學(xué)分析Tal(T-cell acute lymphocytic leukemia)是一個參與造血和胚胎血管生成的重要轉(zhuǎn)錄因子,對于生物造血功能至關(guān)重要。為了研究Tal在香港牡蠣中的免疫功能,本研究采用RACE技術(shù)克隆了香港牡蠣Tal基因的c DNA全長序列,命名為Ch Tal,該基因全長812 bp,其中5’非編碼區(qū)17 bp,3’非編碼區(qū)135 bp,開放閱讀框(ORF)660 bp...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 香港牡蠣的生物學(xué)概述與研究進(jìn)展
        1.1.1 香港牡蠣的生物學(xué)概述
        1.1.2 貝類在免疫學(xué)研究的進(jìn)展
    1.2 Tal基因的概述與研究進(jìn)展
        1.2.1 Tal基因的概述
        1.2.2 Tal基因研究進(jìn)展
    1.3 本文的研究目的與意義
        1.3.1 研究目的與意義
        1.3.2 實驗研究技術(shù)路線
第二章 香港牡蠣Tal基因的克隆與生物信息學(xué)分析
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 本實驗所使用的引物
    2.3 實驗方法
        2.3.1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.3.2 總RNA提取和c DNA合成
        2.3.3 SMART RACE
        2.3.4 瓊脂糖凝膠電泳及切膠回收
        2.3.5 片段連接
        2.3.6 轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
        2.3.7 陽性克隆的篩選與測序
        2.3.8 生物信息學(xué)分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 香港牡蠣Tal克隆片段的特點
        2.4.2 香港牡蠣Tal生物信息學(xué)分析
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 香港牡蠣Tal組織分布和細(xì)菌感染下的表達(dá)模式
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 實驗試劑
        3.2.3 實驗儀器
        3.2.4 本實驗中所使用的引物
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細(xì)菌感染
        3.3.2 RNA提取與c DNA的合成
        3.3.3 實時定量PCR表達(dá)水平定量檢測
        3.3.4 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 香港牡蠣Tal的組織分布
        3.4.2 香港牡蠣Tal在細(xì)菌感染下的表達(dá)模式
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第四章 香港牡蠣Tal亞細(xì)胞定位及在淋巴細(xì)胞再生中的功能
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗動物
        4.2.2 實驗試劑
        4.2.3 實驗儀器
        4.2.4 本實驗所用的引物
    4.3 實驗方法
        4.3.1 RNA提取和cDNA的合成
        4.3.2 pEGFP-Tal真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        4.3.4 pEGFP-Tal的亞細(xì)胞定位
        4.3.5 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.3.6 目的蛋白的誘導(dǎo)與純化
        4.3.7 血細(xì)胞計數(shù)與Edu增殖測定
        4.3.8 數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 香港牡蠣Tal的亞細(xì)胞定位
        4.4.2 香港牡蠣Tal的功能研究
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄



本文編號：4006237