發(fā)布時間：2025-06-24 02:01

　　葡萄作為重要的經(jīng)濟作物,具有巨大的食用和經(jīng)濟價值,但其產(chǎn)量往往受到致病菌的影響。我國的葡萄栽培面積較為廣泛,且部分中國野生葡萄對病原菌表現(xiàn)出一定的抗性。芪類化合物是葡萄中一種次生代謝產(chǎn)物,其中白藜蘆醇為主要的抗菌成分,是植物用來抵御致病菌侵害的主要防御機制之一。在芪類化合物的合成過程中,轉(zhuǎn)錄因子MYB14發(fā)揮著不可或缺的作用,它可以激活芪合成酶/白藜蘆醇合成酶,進而對芪類化合物的合成起到重要的調(diào)控作用。在本研究中,我們從中國野生毛葡萄‘平邑’(Vitis quinquangularis-Pingyi,V.quinquangularis-PY)中鑒定了一種轉(zhuǎn)錄因子MYB14,可以通過過表達該轉(zhuǎn)錄因子,來提高芪合成酶基因(St Sy)的表達和主要的芪類化合物-白藜蘆醇的含量。研究表明,Vq MYB14啟動子p Vq MYB14的激活與flg22引發(fā)的病原相關(guān)分子模式觸發(fā)免疫(PTI)以及harpin引發(fā)的效應(yīng)子觸發(fā)免疫(ETI)有關(guān)。同時我們發(fā)現(xiàn)Vq MYB14和歐洲栽培葡萄佳麗釀Vv MYB14的啟動子存在三個部分的序列差異,特別是p Vq MYB14中的一個11bp片段,對PTI和ETI...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞對照表
第一章 緒論
    1.1 葡萄研究概況
    1.2 植物的免疫
    1.3 參與植物免疫的早期信號通路
        1.3.1 鈣離子
        1.3.2 活性氧
        1.3.3 MAPK級聯(lián)途徑
    1.4 芪類化合物
        1.4.1 芪類化合物在植物抗逆反應(yīng)中的作用
        1.4.2 調(diào)控芪類化合物合成的上游信號分子
    1.5 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控芪類化合物的合成
        1.5.1 R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子
        1.5.2 轉(zhuǎn)錄因子MYB14對芪類化合物合成的調(diào)控
    1.6 誘導(dǎo)子flg22和harpin
    1.7 研究目的及意義
第二章 載體構(gòu)建和平邑VqMYB14_PY過表達分析
    2.1 材料及試劑
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 試劑制備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 提取‘平邑’與佳麗釀的基因組DNA
        2.2.2 克隆‘平邑’與佳麗釀的MYB14
        2.2.3 回收PCR產(chǎn)物
        2.2.4 連接載體T-Vector p MD?19
        2.2.5 轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
        2.2.6 重組克隆載體的菌液PCR檢測
        2.2.7 提取重組質(zhì)粒
        2.2.8 ‘平邑’與佳麗釀MYB14啟動子區(qū)域的克隆
        2.2.9 MYB14 啟動子與GUS融合表達載體的構(gòu)建
        2.2.10 pVqMYB14和pVvMYB14 突變體的構(gòu)建
        2.2.11 啟動子序列分析
        2.2.12 中國野生毛葡萄‘平邑’VqMYB14過表達分析
        2.2.13 平邑VqMYB14_PY系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子序列分析及平邑MYB14 的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系
        2.3.2 VqMYB14的過表達增強了芪合成酶基因的表達和芪類化合物的積累
        2.3.3 平邑和佳麗釀MYB14啟動子克隆及序列分析
        2.3.4 平邑和佳麗釀MYB14 啟動子與GUS融合表達載體的構(gòu)建
    2.4 小結(jié)
第三章 啟動子活性
    3.1 實驗材料及試劑
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑配制
        3.1.3 器材
    3.2 實驗步驟
        3.2.1 瞬時轉(zhuǎn)化煙草葉片
        3.2.2 Flg22和harpin處理轉(zhuǎn)基因煙草葉片
        3.2.3 實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測啟動子活性
            3.2.3.1 RNA的提取
            3.2.3.2 cDNA的合成
            3.2.3.3 實時熒光定量PCR檢測啟動子活性
        3.2.4 GUS組織化學(xué)染色
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 經(jīng)flg22和harpin誘導(dǎo)后,pVqMYB14 的活性強于p Vv MYB14
        3.3.2 pVqMYB14和pVvMYB14 活性的差異是和其啟動子結(jié)構(gòu)的差異相關(guān)的
    3.4 小結(jié)
第四章 早期信號的探索
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 實驗試劑
        4.1.2 植物材料及處理方法
    4.2 實驗方法
        4.2.1 測定‘平邑’葡萄葉片中的H₂O₂含量
        4.2.2 芪類化合物的提取
        4.2.3 實時熒光定量PCR
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 Flg22和harpin誘導(dǎo)下pVqMYB14 的上游信號事件
        4.3.2 Flg22 誘導(dǎo)下VqMYB14 的激活更依賴于Ca2+信號
        4.3.3 Harpin誘導(dǎo)下VqMYB14 的激活更依賴于ROS
        4.3.4 Harpin誘導(dǎo)下的活性氧爆發(fā)早于flg22
    4.4 討論
        4.4.1 鈣離子內(nèi)流
        4.4.2 活性氧爆發(fā)
        4.4.3 MAPK信號
        4.4.4 芪類化合物的產(chǎn)生
第五章 結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝



本文編號：4052328