發(fā)布時間：2020-11-15 20:49

　　 Dip2b基因是Disco關聯(lián)蛋白2(Disco-interacting protein 2,Dip2)基因家族的成員之一,Dip2編碼一類在脊椎動物和無脊椎動物中高度保守的蛋白。目前圍繞Dip2b基因的研究主要為利用高通量測序技術,分析其作為分子標記評估多種疾病的可能性,但有關Dip2b基因本身的生物學功能尚無報道。本實驗室的前期工作發(fā)現(xiàn),敲除Dip2b基因后小鼠呈活動力遲緩、呼吸節(jié)律緩慢、并出生后死亡的表型,雖然其致死機理尚不清楚,但表明Dip2b基因具有重要的生物學功能。由于出生缺陷通�？赡芘c心肺功能發(fā)育異常等疾病相關聯(lián),為進一步探究敲除Dip2b基因致胚胎發(fā)育異常的原因和作用機制,本研究首先探究了Dip2b基因在肺發(fā)育中的作用。利用攜帶LacZ-NEO報告基因的Dip2b基因敲除鼠模型進行組織學觀察表明,Dip2b基因在小鼠肺部的氣管、支氣管及肺泡中表達;冰凍切片染色結果顯示,Dip2b基因的表達位置主要為肺實質結構,即氣管和肺泡的上皮組織,在肺的間充質組織中未見表達。敲除Dip2b基因會導致小鼠結構和功能異常,在結構上,小鼠肺泡數(shù)量減少,間充質組織過度發(fā)育,肺泡間隔板增厚,氣腔變小,呼吸性細支氣管數(shù)量減少;在功能上,新生小鼠的活動能力較差,呼吸節(jié)律較慢,皮膚呈青紫色并在24小時內(nèi)死亡。為進一步探究Dip2b基因對肺發(fā)育中基因表達的調控作用,對敲除Dip2b基因的小鼠進行轉錄組測序,結果表明敲除Dip2b基因影響了多個肺發(fā)育相關的生物學過程,KEGG信號通路富集分析結果表明,Dip2b基因參與HH信號通路,與SHH、WNT5A等生長因子協(xié)同作用于小鼠肺發(fā)育和胚胎發(fā)育。最后,利用條件型敲除系統(tǒng)構建了肺特異性表達轉基因小鼠模型,用于后續(xù)探究Dip2b基因對胚胎發(fā)育的調控作用。本研究通過分析Dip2b基因敲除后肺發(fā)育過程,分析了Dip2b基因影響肺發(fā)育的信號途徑,說明Dip2b參與肺發(fā)育,至少影響其部分肺的生物學功能,有可能是導致小鼠出生后死亡的原因。本研究為解析Dip2基因家族的生物學功能提供了新的依據(jù),并為治療相關遺傳疾病提供了理論依據(jù)。
【學位單位】：東北師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：Q344
【部分圖文】：

圖 1 Dip2btm1a/+小鼠模型驗證Figure 1 Confirmation of Dip2btm1a/+mice model）Dip2btm1a/+小鼠模型示意圖。紅色箭頭和藍色箭頭表示基因型鑒定引物的設計位點，其中acZ 引物 PCR 可獲得 350bp 大小條帶，野生型 Dip2b 引物 PCR 可獲得 300bp 大小條帶；（鑒定凝膠電泳圖。只有 Dip2b 引物條帶的為 Dip2b+/+野生型鼠，只有 LacZ 引物條帶2btm1a/tm1a純合鼠，同時具有兩條帶的為 Dip2btm1a/+雜合鼠；（C）qPCR 檢測 P0 時期不同基因織中 Dip2b 和 LacZ 基因表達量。Dip2b 基因在小鼠肺部表達情況由于小鼠模型中含有 LacZ 報告基因，并且該基因與 Dip2b 基因融合表達，所以的表達位置同樣為 Dip2b 基因的表達位置。因此使用 X-gal 進行染色可以觀察在小鼠體內(nèi)的分布表達情況，從而了解 Dip2b 基因在體內(nèi)的分布表達情況。本要觀察 Dip2b 基因在小鼠肺部的表達情況。通過 Dip2btm1a/+雜合鼠肺部組織結 LacZ 染色結果可以看出，Dip2b 基因在肺部有表達。其中，在氣管和肺葉中中表達較多（圖 2）。

圖 2 Dip2btm1a/+小鼠肺部整體 LacZ 染色Figure 2 Whole mount LacZ staining of Dip2btm1a/+mice lung structurea-c 為 Dip2b+/+野生型鼠，d-f 為 Dip2btm1a/+雜合鼠。其中 a，d 為肺部完整結構；b，e 為部分肺葉結構；c，f 為氣管。圖中比例尺為 2.5mm。為進一步了解 Dip2b 基因在肺部具體的表達位置及表達情況，對 Dip2btm1a/+雜合鼠肺部組織結構進行冰凍切片及 LacZ 染色。冰凍切片 LacZ 染色的結果表明，在肺葉中Dip2b 基因主要在肺泡，尤其是肺泡上皮組織中表達（圖 3）。在氣管中，Dip2b 基因同樣主要在氣管的上皮組織中表達（圖 4）。該結果表明，Dip2b 基因在肺部主要表達于氣管、支氣管和肺泡等實質的上皮組織中，而在間質的毛細血管、結締組織及淋巴等位置并無明顯表達。

圖 2 Dip2btm1a/+小鼠肺部整體 LacZ 染色Figure 2 Whole mount LacZ staining of Dip2btm1a/+mice lung structurea-c 為 Dip2b+/+野生型鼠，d-f 為 Dip2btm1a/+雜合鼠。其中 a，d 為肺部完整結構；b，e 為部分肺葉結構；c，f 為氣管。圖中比例尺為 2.5mm。為進一步了解 Dip2b 基因在肺部具體的表達位置及表達情況，對 Dip2btm1a/+雜合鼠肺部組織結構進行冰凍切片及 LacZ 染色。冰凍切片 LacZ 染色的結果表明，在肺葉中Dip2b 基因主要在肺泡，尤其是肺泡上皮組織中表達（圖 3）。在氣管中，Dip2b 基因同樣主要在氣管的上皮組織中表達（圖 4）。該結果表明，Dip2b 基因在肺部主要表達于氣管、支氣管和肺泡等實質的上皮組織中，而在間質的毛細血管、結締組織及淋巴等位置并無明顯表達。
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 尚娟芳,王遠亮,唐麗靈,牛旭鋒;應力導致的細胞內(nèi)信號轉導和基因表達變化[J];重慶大學學報(自然科學版);2005年01期

2 陳盛亭;溫旺榮;朱永華;李菊香;;HUT78淋巴細胞感染HIV-1病毒后基因表達變化的研究[J];中華微生物學和免疫學雜志;2006年10期

3 李國棟;馬宏;童坦君;張宗玉;;人胚肺成纖維細胞復制性衰老的基因表達變化[J];中國老年學雜志;2012年15期

4 劉成龍,靳安民,周初松,閔少雄,姚偉濤;脊髓損傷后誘導型一氧化氮合酶基因表達變化的實驗研究[J];第一軍醫(yī)大學學報;2001年05期

5 莫建文;黃河;張春強;王兵;何飛;殷亮;徐軍;陳昊;趙學凌;李世和;;創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成中補體相關基因表達變化的實驗研究[J];中國急救醫(yī)學;2008年03期

6 周崗;謝曉華;付小兵;楊靖;孫同柱;;汗腺細胞與骨髓間充質干細胞共培養(yǎng)過程中基因表達變化及意義[J];中華實驗外科雜志;2007年10期

7 趙冰;孫趙麟;楊亮;梁海華;沈立新;段康民;;一種利用基因表達變化檢測、鑒別抗生素的新方法[J];生物工程學報;2010年01期

8 梁燕;嚴建萍;譚湘陵;;低溫脅迫下水稻幼根乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶基因表達變化[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學;2012年03期

9 景德強,陳爾瑜;梭曼誘發(fā)驚厥后腦內(nèi)信號物質及細胞程序死亡相關基因表達變化的定位研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;1997年04期

10 劉冠明;林增順;鄭奕雄;徐慶國;;花生下胚軸曝光與不曝光差異表達基因的數(shù)字表達譜分析[J];基因組學與應用生物學;2018年12期

相關博士學位論文 前10條

1 高金欣;clvelB和clt-1基因調控玉米彎孢葉斑病菌毒素合成的分子基礎研究[D];上海交通大學;2017年

2 劉立;EZH2、HOX、MYCN基因在MDS發(fā)病機制中的作用探討[D];上海交通大學;2016年

3 黃玲;Iars基因在大血管壁重構中的作用及相關機制研究[D];武漢大學;2017年

4 紀瓊;基于轉錄組測序篩選HIE差異表達基因及其作用機制研究[D];吉林大學;2018年

5 平艷艷;基于多組學數(shù)據(jù)挖掘膠質母細胞瘤的功能模塊[D];哈爾濱醫(yī)科大學;2014年

6 董一;年齡相關性黃斑變性轉錄組表達特征及臨床治療研究[D];鄭州大學;2017年

7 高羿;水稻開花與胚乳發(fā)育相關基因表達特征研究[D];武漢大學;2013年

8 陳帥;煙草類黃酮代謝途徑中關鍵酶CHS基因與R2R3 MYB類轉錄抑制因子功能研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2017年

9 丁新倫;脫落酸在水稻條紋病毒與寄主水稻互作中的作用[D];福建農(nóng)林大學;2008年

10 趙彥朋;棉籽油分合成基因表達譜及棉花PEPC基因功能初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 楊安瀾;Dip2b基因在肺發(fā)育中的作用研究[D];東北師范大學;2019年

2 譚俊峰;玉米NAC轉錄因子及其潛在靶基因糖基轉移酶47的家族進化分析與功能初探[D];西北農(nóng)林科技大學;2018年

3 張臻;白來航蛋雞首次產(chǎn)蛋前后腸道與肝臟轉錄組的研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學;2017年

4 王俊杰;馬爾尼菲藍狀菌Tcr1、IDO1和IDO2基因功能的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學;2018年

5 賀哲;獼猴桃受葡萄座腔菌侵染后木葡聚糖內(nèi)糖基轉移/水解酶（XTH）基因的克隆及功能分析[D];江西農(nóng)業(yè)大學;2018年

6 李超燕;橡膠樹HbPEPRK1基因的克隆與表達調控分析[D];海南大學;2016年

7 郭建勇;家蠶質型多角體病毒BmCPV-miR-1的鑒定和功能研究[D];江蘇科技大學;2018年

8 程珍霞;秋橄欖類胡蘿卜素生物合成相關基因的功能研究[D];浙江師范大學;2015年

9 王續(xù)峰;基于基因共表達網(wǎng)絡的基因差異性表達分析[D];山東財經(jīng)大學;2017年

10 楊飛虹;不同發(fā)育期大鯢性腺Sox9、Cyp19、Esr1基因的表達[D];陜西師范大學;2015年

本文編號：2885188