發(fā)布時間：2024-06-04 18:47

　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)對細胞應(yīng)激(包括代謝不平衡和/或蛋白質(zhì)折疊不平衡)有很好的感覺和反應(yīng)。對于第一個對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的受體,PERK與其他近端信號分子一起啟動轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)節(jié)程序,稱為未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)。持續(xù)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的結(jié)果是活性氧物質(zhì)的積累,以至于促進氧化應(yīng)激狀態(tài)。PERK信號通過激活核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子2(NRF2)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子4(ATF4)來連接ER應(yīng)激反應(yīng)與氧化應(yīng)激信號。NRF2同屬于CNC家族,在其C-端含有一個典型的BRLZ結(jié)構(gòu)域,并能通過調(diào)節(jié)下游靶基因血紅素加氧酶1(HO-1)來減緩內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度。為了研究草魚NRF2基因在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用,我們重新克隆并鑒定了草魚(Ctenopharyngodon idella)NRF2的開放閱讀框(ORF),發(fā)現(xiàn)這條ORF(1782bp)是能夠編碼593個氨基酸的多肽并且包含了一個保守的bZIP結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進化樹顯示草魚NRF2與其它魚類的NRF2在進化上有著更為密切的關(guān)系。不同時間段TM(衣霉素)刺激CIK細胞后,RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)CiNRF2 mRNA水平明顯上調(diào)。以CiBIP為靶標,過表達CiNRF2后CiBIP mRNA明顯下...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.2NRF2/ATF4-HO-1信號通路模式圖

第一章前言為PERK磷酸化eIF2α的下游基因來調(diào)控CHOP基因的表達，從而促進細胞凋亡。通過酵母雙雜交實驗驗證了ATF4可以作為NRF2的一個結(jié)合蛋白存在，形成的異源二聚體在應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[73]。當細胞處于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時，PERK與分子伴侶GRP78....

圖3，1草魚N田田2基因CDSF運‘3.ICDgofCIN衛(wèi)FZge們e

第三章結(jié)果與分析第三章結(jié)果與分析克隆及其分析放閱讀框（CDS）的克隆AGI93118.1）序列設(shè)計同源引物NRF2因部分同源片段。測序后用NCBI的似度，確定為草魚NRF2基因。經(jīng)過閱讀框（圖3.1）。

圖3.2草魚NRF2序列分析

結(jié)果顯示CiNRF2的經(jīng)典BRLZ（bZIP）結(jié)構(gòu)域（483-547aa）位于近C端(圖3.2B)。A1ATGATGGAGATTGAATTGCCTAAAATGCACCCAAGCCAACAGGATATGGAGCTGATAGAT1MMEIELPKMH....

圖3.3草魚NRF2系統(tǒng)進化樹

3.3TM上調(diào)草魚NRF2表達分析草魚腎細胞（CIK）經(jīng)過不同時間段的衣霉素（TM）刺激后，使用實時熒光定量PCR對草魚NRF2基因的mRNA表達情況進行分析，結(jié)果如圖3.5所示。TM會上調(diào)草魚NRF2的表達，并且圖中可以看出在4h開始上調(diào)，至36h達到最高....

本文編號：3989029