發(fā)布時(shí)間：2024-07-06 04:23

　　旨在獲得能降解玉米糠木聚糖的阿拉伯呋喃糖苷酶,并對(duì)其進(jìn)行異源表達(dá)和酶學(xué)性質(zhì)分析。稻平臍蠕孢(Bipolaris oryzae)是重要的植物病原菌,它編碼、分泌糖苷水解酶降解植物的木質(zhì)纖維素利于侵襲感染。從稻平臍蠕孢中克隆得到一個(gè)新的GH43家族阿拉伯呋喃糖苷酶基因BoAra43A并將其在大腸桿菌中成功表達(dá)。分析發(fā)現(xiàn)重組酶BoAra43A的最適溫度為50℃,在40℃處理2 h后活力還剩90.6%活性;最適pH為5.0,在pH 3.0-9.0比較穩(wěn)定,可保持80%以上的酶活力。BoAra43A可降解富含側(cè)鏈的異質(zhì)性木聚糖如小麥阿拉伯木聚糖(WAX)、玉米糠(CX)及其堿提物(CX-NaOH)和寡糖如A^2,3XX、XA^2,3XX、AA^2,3AA/AAA³A中的阿拉伯糖,推斷其能降解阿拉伯糖雙取代的木聚糖中α-(1→3)連接的阿拉伯糖。PsAra43A是來源于Paenibacillus sp.E18的GH43阿拉伯呋喃糖苷酶,降解異質(zhì)性木聚糖上的單取代阿拉伯糖側(cè)鏈。使用BoAra43A預(yù)先處理CX、再和阿拉...

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圖1BoAra43A和特異腐質(zhì)霉阿拉伯呋喃糖苷酶HiAXHd3的氨基酸序列比對(duì)

2.4BoAra43A的作用模式分析圖2重組蛋白BoAra43A的純化

圖2重組蛋白BoAra43A的純化

圖1BoAra43A和特異腐質(zhì)霉阿拉伯呋喃糖苷酶HiAXHd3的氨基酸序列比對(duì)圖3離子色譜分析BoAra43A降解多糖的反應(yīng)產(chǎn)物

圖3離子色譜分析BoAra43A降解多糖的反應(yīng)產(chǎn)物

圖2重組蛋白BoAra43A的純化圖4溫度及pH對(duì)BoAra43A的影響測(cè)定

圖4溫度及pH對(duì)BoAra43A的影響測(cè)定

圖3離子色譜分析BoAra43A降解多糖的反應(yīng)產(chǎn)物從上述對(duì)多糖的離子色譜分析表明,BoAra43A特異的從多糖中釋放出阿拉伯糖。為了進(jìn)一步分析其作用模式,選取了9種含阿拉伯糖的寡糖作為底物同BoAra43A進(jìn)行孵育,并以離子色譜進(jìn)行分析(圖5)。表2是這9種含阿拉伯糖的寡糖的結(jié)....

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