【摘要】：研究已證實DNA是人類主要遺傳物質(zhì)，但人類基因組并非人們所想的那樣穩(wěn)定。諸如基因重排、擴增、缺失、突變和DNA甲基化類型改變等時有發(fā)生，這些改變對于基因表達和調(diào)控，以及疾病過程的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸等方面均具有重要意義。因此自從James Dewey Watson和Francis Crick發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋結(jié)構以來，伴隨著現(xiàn)代分子生物學技術越來越廣泛地被用于人類疾病研究的諸多領域，機體的生理與病理狀態(tài)研究主要集中在DNA水平變化上的研究。DNA各級結(jié)構、理化性質(zhì)、功能就成為醫(yī)學界的研究熱點。許多遺傳性疾病腫瘤與DNA變化關系密切。為進一步研究DNA這些變化引起的相應病理結(jié)果，許多研究者選擇細胞、動物模型等進行相關疾病研究。近年來，石蠟包埋組織逐漸成為新的研究選材。Goelz(1985)和Dubeau等（1986）成功地從蠟塊中提取出高質(zhì)量的DNA，完全可以滿足某些腫瘤分子生物學研究的需要，結(jié)束了DNA研究依賴于新鮮或冰凍的材料，在診斷與鑒別診斷研究和患者預后評估等方面均具有重要價值。病理科石蠟包埋組織成為獲取DNA的研究材料有很多自身優(yōu)勢。蠟塊包埋的組織是手術標本，直接來自于個體，能最直接根本的反映其疾病變化；對于腫瘤性疾病，取材時要同時取腫瘤及正常組織，在研究時就有很好的對照組；石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結(jié)構，也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織形態(tài)變化的主要方法。經(jīng)過一系列處理后組織塊可在包埋石蠟中永久保存，就可以獲取大量樣本，成為很好的回顧性研究材料，以便相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。文獻也報道過蠟塊包埋組織有一定的局限性。制片過程中要經(jīng)酒精和二甲苯等有機溶劑處理，因此很易造成組織內(nèi)抗原性的喪失。研究也表明，固定劑的類型直接影響DNA的提取質(zhì)量；隨著固定時間延長，DNA堿基與組蛋白之間的甲基交聯(lián)產(chǎn)生的越多，獲取的DNA就會變少；固定劑成分、濃度、酸堿度以及溫度等因素對DNA提取也會有一定的影響。眾多因素的影響，從石蠟包埋組織中獲取高質(zhì)量及大分子量DNA成為亟待解決的問題。文獻報道硅珠提取法常用于高度腐敗及微量檢材的DNA提取，但用于石蠟包埋組織的提取文獻少見報道。本實驗結(jié)合硅珠法具有高吸附DNA特性的優(yōu)點，運用到石蠟包埋組織中提取DNA。結(jié)果顯示硅珠法提取的DNA效果經(jīng)統(tǒng)計學計算，優(yōu)于有機法提取，且得到的DNA分子量也優(yōu)于有機法法。因此，本實驗從獲取石蠟包埋組織中高質(zhì)量的DNA角度進行實驗，探討各種方法對DNA提取的效果的評估，希望以此為今后的研究提供一些基礎資料。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363
【參考文獻】
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本文編號：
2785054
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