發(fā)布時(shí)間：2024-06-30 14:12

　　胚胎干細(xì)胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)由于其特性,即在分化為其他不同類型細(xì)胞的同時(shí)還能保持自己不斷更新的狀態(tài)而成為科學(xué)家們重點(diǎn)關(guān)注的對象。目前關(guān)于胚胎干細(xì)胞的研究中最多的是小鼠胚胎干細(xì)胞(mouse ESCs,mESCs),我們先前研究表明CP2家族轉(zhuǎn)錄因子Tfcp2l1(Transcription factor CP2-like protein 1)是mESCs維持自我更新的一個(gè)重要基因。Tfcp2l1是自我更新相關(guān)信號通路LIF/STAT3、Wnt/β-catenin以及FGF/MEK/ERK的共同靶點(diǎn)。Tfcp2l1轉(zhuǎn)錄本的上調(diào)能夠代替細(xì)胞因子LIF或Wnt/β-catenin信號激動劑和FGF/MEK/ERK通路的抑制劑(CHIR99021和PD0325901,即2I)介導(dǎo)的自我更新促進(jìn)作用。更重要的是,與LIF/STAT3信號通路的其他靶基因相比,只有下調(diào)Tfcp2l1才有可能削弱LIF介導(dǎo)的自我更新作用。此外,Tfcp2l1能夠?qū)⑿∈笸馀邔痈杉?xì)胞(mouse Epiblast Stem Cells,mEpiSCs)重編程回到mESCs狀態(tài)。因此,T...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1.3鑒定β-TrCP2對Tfcp2l1的調(diào)節(jié)作用

第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果32圖3.1.2.敲低β-TrCP1驗(yàn)證其對Tfcp2l1蛋白的調(diào)控作用(A)β-TrCP1shRNA慢病毒和β-TrCP1shRNA慢病毒感染mESCs，在LIF/血清培條件下檢測β-TrCP1和Tfcp2l1的表達(dá)水平。數(shù)據(jù)給出了三個(gè)生物重復(fù)的平均值±S。**p....

圖3.2.1.β-TrCP1與野生型Tfcp2l1的蛋白結(jié)合能力較強(qiáng)

第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果34(Tfcp2l1-Mut)。為了弄清楚Tfcp2l1上的DSGDNS殘基是否是β-TrCP1結(jié)合的位點(diǎn)。我們同樣的進(jìn)行了免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，首先，我們將Flag標(biāo)記的野生型和構(gòu)建成功的突變型Tfcp2l1分別轉(zhuǎn)導(dǎo)到HA標(biāo)記的β-TrCP1的46C小鼠胚胎干細(xì)胞中，用....

圖3.2.2.野生型Tfcp2l1的泛素化強(qiáng)于突變型Tfcp2l1

第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果36圖3.2.2.野生型Tfcp2l1的泛素化強(qiáng)于突變型Tfcp2l1（A）免疫印跡分析mESCs中在CHX作用下分別過表達(dá)Flag-Tfcp2l1和Flag-Tfcp2l1Mut細(xì)胞株中Tfcp2l1蛋白的表達(dá)，GAPDH作為上樣量一致的對照。（B）將上述4個(gè)不同....

圖3.3.1.MK2負(fù)調(diào)控Tfcp211蛋白的表達(dá)

安徽大學(xué)碩士學(xué)位論文37考數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)同樣的S393和S397是MK2識別和磷酸化的兩個(gè)預(yù)測磷酸化位點(diǎn)，其共識磷酸化位點(diǎn)是SXXXS[最終的S可以是T]。為了了解Tfcp2l1的穩(wěn)定性是否受MK2控制，我們進(jìn)行了三個(gè)實(shí)驗(yàn)。首先，我們在mESCs中強(qiáng)制過表達(dá)HA標(biāo)記的MK2，空載作....

本文編號：3998854