發(fā)布時(shí)間：2024-12-15 22:06

　　N-乙酰神經(jīng)氨酸(NeuAc)是一種常見(jiàn)的唾液酸,在自然界中廣泛存在,可以用于合成其他唾液酸或者唾液酸的衍生物。同其他唾液酸一樣,NeuAc主要存在于糖鏈的末端,對(duì)細(xì)胞的生物識(shí)別具有重要作用。此外,NeuAc本身還可以作為保健食品和藥品,具有較高的商業(yè)價(jià)值。目前,NeuAc的生產(chǎn)和提取獲得方式存在諸多問(wèn)題,因此使用葡萄糖等廉價(jià)碳源,在不添加任何前體的情況下來(lái)生產(chǎn)NeuAc具有許多優(yōu)勢(shì)。目前已有的微生物發(fā)酵生產(chǎn)NeuAc方法產(chǎn)量較低,不適合大規(guī)模的應(yīng)用。同時(shí),在發(fā)酵過(guò)程中有大量的乙酰葡萄糖胺和乙酰甘露糖胺積累。根據(jù)代謝特征分析,我們推測(cè)NeuAc生產(chǎn)的限速酶為乙酰葡萄糖胺-2-異構(gòu)酶和N-乙酰神經(jīng)氨酸合酶。因此選擇了目前報(bào)道的酶活最高的兩種乙酰葡萄糖胺-2-異構(gòu)酶和三種神經(jīng)氨酸合酶進(jìn)行組合和搖瓶發(fā)酵。使用Agea和NeuBc替換PB后的質(zhì)粒NeuAc產(chǎn)量提高了 1.5倍,證明了 Age和NeuB確實(shí)是NeuAc生產(chǎn)途徑的關(guān)鍵酶。除了酶的來(lái)源以外,酶的表達(dá)強(qiáng)度對(duì)產(chǎn)量也有較大影響。因此在更換關(guān)鍵酶的基礎(chǔ)上,我們對(duì)酶的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行了優(yōu)化,使得NeuAc產(chǎn)量提高了 1.2倍。而繼續(xù)增強(qiáng)表達(dá)強(qiáng)度沒(méi)有...

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＮｅｕＡｃ的分子結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＮｅｕＡｃ??在藥用價(jià)值方面，ＮｅｕＡｃ是重要的藥物前體Ｍ

醇［３］。唾液酸??是一類(lèi)帶負(fù)電荷的糖類(lèi)，它們衍生自２－酮－３－脫氧－Ｄ－甘油－Ｄ－半乳糖－壬酸（ＫＤＮ），??共有九個(gè)碳原子骨架。迄今為止，己經(jīng)鑒定出５０多種唾液酸，在人類(lèi)和其他哺??乳動(dòng)物中，Ｎ－乙酰胺基祌經(jīng)氨酸（ＮｅｕＡｃ）是主要的唾液酸，在生物學(xué)，病理學(xué)??和免疫識(shí)別過(guò)程....

圖２－１大腸桿菌ＮｅｕＡｃ生產(chǎn)途徑??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ＮｅｕＡｃ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ｉｎ＾＂．?ｃｏｌｌ??我們首先考慮提Ｓ?Ａｇｅ和ＮｅｕＢ的酶活

在此基礎(chǔ)上敲除ＮｅｕＡｃ降解基因操??縱子和乙釀葡萄糖胺的降解基因操縱子，使得ＮｅｕＡｃ產(chǎn)量進(jìn)一步提高。將??產(chǎn)生乙酸和乳酸的副產(chǎn)物途徑敲除后ＮｅｕＡｃ產(chǎn)量達(dá)到了?７．１?ｇ／Ｌ。然而神經(jīng)氨酸??醛縮酶ＮａｎＡ催化的是一個(gè)可逆反應(yīng)，這就阻礙了?ＮｅｕＡｃ的積累。我們將神經(jīng)??氨酸....

圖２－５?ｐＢａｃ與ｐＢｂｃ的分批發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)比??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｂａｔｃｈ?ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｐＢａｃ?ａｎｄ?ｐＢｂｃ??３９??

山東大學(xué)博士學(xué)位論文??我們也嘗試了引入來(lái)自空腸彎曲桿菌的ＵＤＰ－ＧｌｃＮＡｃ－２－異構(gòu)酶ＮｅｕＣ，使得??ＧｌｃＮ－６Ｐ可以經(jīng)過(guò)ＵＤＰ－ＧｌｃＮＡｃ去往ＮｅｕＡｃ?（圖２－３），將該質(zhì)粒命名為ｐＢａｃｃ。??然而結(jié)果發(fā)現(xiàn)這一支路的引入并沒(méi)有使ＮｅｕＡｃ產(chǎn)量增加（圖２－４）�？赡�....

圖２－６?ＤＮ５／ｐＢａｃ搖瓶補(bǔ)料發(fā)酵結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－６?Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＤＮ５／ｐＢａｃ?ｓｈａｋｅｒ?ｆｅｅｄ??

對(duì)ＤＮ５／ｐＢａｃ進(jìn)行了搖瓶分批補(bǔ)料發(fā)酵，經(jīng)過(guò)７２小時(shí)的發(fā)酵，ＮｅｕＡｃ產(chǎn)量不??再增加，此時(shí)積累了?５．４ｇ／Ｌ的ＮｅｕＡｃ?（圖２－６）。在發(fā)酵過(guò)程中，有大量ＧｌｃＮＡｃ??的積累，而ＭａｎＮＡｃ也有少量積累。我們推測(cè)，ＧｌｃＮＡｃ和ＭａｎＮＡｃ的積累仍然??會(huì)影響ＮｅｕＡｃ....

本文編號(hào)：4016537