發(fā)布時間：2020-12-06 19:05

　　目的:1)誘導(dǎo)人脂肪干細胞（human adipose derived stem cells,hASCs）向平滑肌細胞分化并鑒定;2)探討miR-145在hASCs向平滑肌細胞分化過程中的表達及作用;3)預(yù)測miR-145的作用靶基因,并確定miR-145及其靶基因?qū)�hASCs向平滑肌細胞分化過程中的作用機制;4)闡明鈣離子/鈣調(diào)素依賴的蛋白激酶IIγ（Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase IIγ,Ca MKIIγ）在hASCs向平滑肌細胞分化過程中的表達與作用機制。方法:1)分離培養(yǎng)人脂肪干細胞并鑒定;將第三代hASCs在轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）和骨形態(tài)蛋白4（BMP4）的作用下向平滑肌細胞誘導(dǎo)分化,用熒光定量PCR、western blot、免疫熒光等方法檢測平滑肌細胞特異性標(biāo)記物的表達;2)hASCs向平滑肌細胞誘導(dǎo)7天以后檢測miR-145的表達情況;合成miR-145模擬物及抑制物,并將其轉(zhuǎn)染到hASCs,檢測轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染成功以后進行誘導(dǎo),觀察平滑肌細胞特異性標(biāo)記物的表達,并確定miR-145在這過程中的作用;3)利用生物... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代人脂肪干細胞,×40

新疆醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 結(jié)果.1 人脂肪干細胞的生長狀況及鏡下形態(tài)原代培養(yǎng)的脂肪干細胞在接種后的 24 小時呈現(xiàn)短、細的條索狀，并含有少量的造血細胞，48 小時以后細胞迅速增長，第 4~5 天達到生長平臺期。當(dāng)細胞匯達到 80%左右時進行傳代。第三代人脂肪干細胞形態(tài)均一，排列有序，成纖維體狹長。（圖 1-1，圖 1-2）

（圖 1-1，圖 1-2）圖 1-1 原代人脂肪干細胞, ×40 圖 1-2 第三代人脂肪干細胞, ×40Fig.1-1 hASCs at first passage, ×40 Fig.1-2 hASCs at third passage, ×40 人脂肪干細胞表面抗原的檢測實驗所用的第三代至第五代人脂肪干細胞進行了流式細胞術(shù)檢測細胞表結(jié)果顯示：CD13、CD34、CD44、CD49d、CD90、CD105 以及 CD166 陽而造血細胞與內(nèi)皮細胞表達的 CD14、CD45 與 CD31 陰性表達，根據(jù)這個內(nèi)皮細胞和造血系的污染。（圖 1-3，表 1-2）


本文編號：2901883