發(fā)布時間：2024-06-27 21:48

　　目的1.體外對人小涎腺上皮干/祖細(xì)胞(hMSG-EpiPCs)進(jìn)行成肝誘導(dǎo),鑒定誘導(dǎo)獲得細(xì)胞的表型和檢測其是否具有成熟肝臟細(xì)胞相關(guān)功能。2.移植hMSG-EpiPCs給急性肝損傷模型小鼠,鑒定其對小鼠急性肝功能損傷的修復(fù)能力,評估移植細(xì)胞成活率及肝內(nèi)轉(zhuǎn)歸。方法1.利用組織塊貼壁法從人小涎腺組織中分離培養(yǎng)出上皮干/祖細(xì)胞,體外傳代擴(kuò)增培養(yǎng)。利用免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)鑒定其干細(xì)胞表型和特異性標(biāo)記物。體外Matrigel構(gòu)建三維培養(yǎng)環(huán)境下對hMSG-EpiPCs進(jìn)行成肝誘導(dǎo)并設(shè)立空白對照組。利用免疫熒光及Real-time PCR檢測誘導(dǎo)而來的細(xì)胞相關(guān)肝臟細(xì)胞表型表達(dá),并通過PAS染色、ICG攝取和CYP450功能測定檢測其相關(guān)成熟肝臟細(xì)胞功能。2.使用CM-Dil熒光標(biāo)記hMSG-EpiPCs并觀察標(biāo)記后細(xì)胞生長情況。建立聯(lián)合免疫缺陷(SCID/Beige)小鼠20%CC14腹腔注射急性肝損傷模型,隨機(jī)分為兩組:實驗組移植hMSG-EpiPCs(n=12),對照組注射PBS(n=12),另取正常SCID小鼠作為空白對照組(n=3)。術(shù)后觀察小鼠體重變化。并于移植后1天、3天、1周及2周分別取...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1hMSCrEpiPCs原代及傳代培養(yǎng)

ａ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ原代培養(yǎng)；ｂ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ傳至Ｐ３獲得形態(tài)均一細(xì)胞；ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ傳至Ｐ２５出現(xiàn)衰老細(xì)胞??－ＨＩ?ｆｆ??０?？，?Ｋ４?Ｖ?０?Ｗ＊?？？，?＾?？?１０＊?？？，?ｗ４??￥ｍｉＡ?ｍｍ?ｔｔｔｒ－Ａ?ｒｒｍ＊?ｍ－ａ?ｍ??ｊ：....

圖１－２?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ流式細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果??

?博士學(xué)位論文??■■■??圖１－１?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ原代及傳代培養(yǎng)??ａ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ原代培養(yǎng)；ｂ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ傳至Ｐ３獲得形態(tài)均一細(xì)胞；ｃ??ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ傳至Ｐ２５出現(xiàn)衰老細(xì)胞??－ＨＩ?ｆｆ??０?？，?Ｋ４?Ｖ?０?Ｗ＊?？？，?＾?？....

圖1-4hE}SCr-EpiPC:體外成肝誘導(dǎo)

ｍｍａ—■??圖１－３?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ免疫熒光??紅色及綠色示陽性染色，藍(lán)色示ＤＡＰＩ染核，標(biāo)尺見右下角??

圖1-3hMSCrEpiPCs免疫熒光紅色及綠色示陽性染色，藍(lán)色示DAPI染核，標(biāo)尺見右下角

■■■■??圖１－４?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ體外成肝誘導(dǎo)??誘導(dǎo)初期，細(xì)胞狀態(tài)好，逐漸生長聚集成細(xì)胞球；后期隨細(xì)胞誘導(dǎo)成熟，增殖能??力下降，出現(xiàn)壞死細(xì)胞碎片??

本文編號：3995975