發(fā)布時(shí)間：2017-12-23 13:31

  本文關(guān)鍵詞：鴿源新城疫病毒的遺傳進(jìn)化分析及其免疫原性研究　出處：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)可以引起多種禽類發(fā)生急性、烈性、敗血性、高度接觸性傳染病。近年來,鴿中流行的新城疫(Newcastle disease,ND)出現(xiàn)了越來越嚴(yán)重的趨勢(shì),由于鴿的活動(dòng)范圍較廣,其攜帶的病原嚴(yán)重威脅養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展。對(duì)鴿源ND進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析及免疫原性研究,對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。新城疫嚴(yán)重危害世界各國養(yǎng)禽業(yè),受到各國政府的高度重視。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了一對(duì)NDV通用鑒定引物,對(duì)分離自不同地區(qū)的8株NDV進(jìn)行擴(kuò)增,通過對(duì)F基因分型相關(guān)序列的生物遺傳進(jìn)化分析進(jìn)行了基因分型。經(jīng)遺傳進(jìn)化分析,Du/China/SD/133株和Ch/China/SD/128株屬于classⅡ基因Ⅶ型;Du/China/SD/143株屬于classⅠ;Ch/China/SD/125株的病料中發(fā)現(xiàn)了classⅠ和classⅡ基因Ⅶ型ND的混合感染;Pi/China/SD/2012/132(ND132)、Pi/China/SH/2013/163(ND163)、Pi/China/SH/2013/167(ND167)、Pi/China/SH/2013/168株(ND168)四個(gè)鴿源毒株屬于classⅡ基因Ⅵb亞型。我們?cè)贜D163和ND168的病料中檢測(cè)到與La Sota高度同源的基因Ⅱ型毒株的混合感染,推測(cè)源于鴿場(chǎng)La Sota弱毒免疫,暗示La Sota疫苗不能對(duì)鴿ND起到較好保護(hù)效果。為了確定目前中國鴿ND主要流行毒株的遺傳進(jìn)化關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了一套NDV全基因組擴(kuò)增引物,對(duì)分離自上海和山東的4株鴿源NDV毒株進(jìn)行了全基因序列測(cè)定和分析。各基因的遺傳進(jìn)化分析結(jié)果顯示,四個(gè)鴿源NDV毒株與中國其它流行株一樣屬于ClassⅡ基因Ⅵb型,與歐洲鴿源分離株親緣關(guān)系很近,暗示可能是由賽鴿比賽等途徑由歐洲傳到中國。四株鴿源病毒F蛋白和HN蛋白均符合強(qiáng)毒株的顯著序列特征,與雞NDV抗原性和疏水性整體差異不大,但有一些重要的抗原表位已經(jīng)發(fā)生了改變。對(duì)鴿源毒株的遺傳進(jìn)化分析,為鴿源新城疫疫苗的研發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。為了確定雞源NDV疫苗株和目前鴿源流行株是否存在免疫原性差異,本研究比較了La Sota與鴿源分離株的血清學(xué)差異以及免疫保護(hù)能力。結(jié)果顯示用ND167制備的鴿源NDV滅活油乳劑疫苗不能對(duì)免疫鴿產(chǎn)生理想的保護(hù)力。血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鴿源強(qiáng)毒株與La Sota的抗原性差異顯著,與生物信息學(xué)分析結(jié)果有所差異,暗示鴿源NDV某些氨基酸位點(diǎn)的改變可能影響了抗原蛋白的空間表位。因此,在實(shí)踐中使用La Sota弱毒疫苗對(duì)鴿進(jìn)行免疫存在免疫失敗的風(fēng)險(xiǎn),鴿專用NDV疫苗的研發(fā)迫在眉睫,以促進(jìn)養(yǎng)鴿業(yè)健康發(fā)展。為了比較鴿源ND流行株與雞源ND經(jīng)典疫苗株的免疫原性差異,本研究進(jìn)行了鴿源毒株抗原特異性單克隆抗體制備的研究。利用分離自上海的鴿源新城疫毒株ND167作為免疫原,免疫BALB/c小鼠,并獲得四株單克隆抗體。交叉ELISA結(jié)果顯示,四株單克隆抗體針對(duì)不同新城疫病毒的反應(yīng)性有較大差異,不同單抗對(duì)La Sota毒株的ELISA效價(jià)差異在500倍以上。本研究獲得了針對(duì)鴿源新城疫特異性抗原表位的單克隆抗體,為后續(xù)篩選鴿源毒株特異性抗原表位奠定了基礎(chǔ),為臨床生產(chǎn)中鴿新城疫的診斷和免疫原性分析提供技術(shù)支持。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉華雷,周斌,郁斌,王永坤,陳溥言;五株鴿副粘病毒國內(nèi)分離株F基因片段的克隆與分子特性[J];病毒學(xué)報(bào);2004年04期

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本文編號(hào)：1324088