發(fā)布時間：2024-12-11 04:18

　　通過構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)鼠源重組CD40L蛋白,探討其對河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)、微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)在免疫BALB/c小鼠的過程中的免疫增強(qiáng)作用,為進(jìn)一步開發(fā)適于小分子半抗原單克隆抗體高效制備的免疫增強(qiáng)佐劑提供新的思路和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。用Trizol試劑提取BALB/c小鼠脾臟總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA,根據(jù)CD40L CDs區(qū)以及可溶性CD40L(sCD40L)區(qū)設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增目的基因,構(gòu)建pGEX4T-1-CD40L和pET-28a-sCD40L重組載體,進(jìn)行原核表達(dá),并純化重組CD40L以及sCD40L蛋白。根據(jù)曼尼希反應(yīng)原理,用甲醛法制備TTX免疫原TTX-BSA和檢測原TTX-OVA;以人工重組蛋白CD40L佐劑組為試驗(yàn)組,弗氏佐劑組作為對照組,免疫BALB/c小鼠,用ELISA方法結(jié)合SPSS軟件分析各組血清抗體水平,探討重組CD40L蛋白在TTX-BSA免疫過程中對免疫效果的影響。用碳二亞胺法將MC-LR與BSA和OVA偶聯(lián),制備免疫原MC-LR-BSA和檢測原MC-LR-OVA;以人工重組蛋白sCD40L佐...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
縮略詞表
引言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第1章 CD40L的研究概述
        1.1 CD40L基因及蛋白結(jié)構(gòu)
        1.2 CD40L與受體之間的作用
        1.3 CD40L的佐劑效應(yīng)及研究進(jìn)展
    第2章 兩種毒素半抗原簡介
        2.1 河豚毒素
        2.2 微囊藻毒素
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 鼠源重組CD40L的原核表達(dá)及其對河豚毒素免疫增強(qiáng)效果分析
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 鼠源重組sCD40L蛋白的原核表達(dá)及其對MC-LR免疫增強(qiáng)效果分析
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 鼠源重組sCD40L蛋白與CD40 受體結(jié)合以及對免疫反應(yīng)的影響
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介及科研成果
致謝



本文編號：4016175