發(fā)布時間：2024-12-19 03:04

　　對蝦白斑綜合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是對蝦養(yǎng)殖業(yè)中存在的主要病原之一,其感染機制尚未明了。本文通過2015-2016年我國部分對蝦養(yǎng)殖區(qū)采集到的WSSV病蝦,以wsv001、wsv025、wsv045三個基因為研究對象對WSSV變異進行分析,并進一步研究了它們在WSSV侵染過程中的作用。主要包括以下內(nèi)容:第一章:為了解我國主要對蝦養(yǎng)殖區(qū)wsv001、wsv025、wsv045基因缺失變異情況,本研究取用2015-2016年從山東、河北、浙江、天津、海南和廣東等六省市采集到的104份WSSV陽性樣本,通過特異引物對目的片段進行擴增,借助測序對樣本的缺失變異進行分析。結果顯示,wsv001的檢出率為25%,wsv025檢出率為23.08%,wsv045檢出率為45.19%,wsv025、wsv045的檢出樣品中,未發(fā)現(xiàn)缺失突變情況;氨基酸序列比對結果顯示擴增的wsv001片段所編碼氨基酸出現(xiàn)三類變異,包括第一類18個氨基酸小片段缺失,第二類121個氨基酸大片段缺失,第三類氨基酸插入情況,此外還有8個氨基酸存在突變。結果表明,我國不同地區(qū)wsv00...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 對蝦白斑綜合征病毒概述與研究進展
    1 WSSV病原學
        1.1 WSSV的形態(tài)結構
        1.2 WSSV的基因結構
    2 WSSV流行病學
        2.1 宿主范圍
        2.2 傳播途徑
            2.2.1 水平傳播
            2.2.2 垂直傳播
    3 WSSV防治措施及RNA干擾技術的應用
        3.1 WSSV的預防措施
        3.2 RNA干擾技術
            3.2.1 RNA干擾技術的發(fā)現(xiàn)
            3.2.2 RNA干擾的作用機制
            3.2.3 RNA干擾技術的應用
    4 本研究的意義及目的
第二章 中國部分地區(qū)對蝦白斑綜合征wsv001、wsv025、wsv045基因缺失變異情況
    1 實驗材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗樣品
        1.2 實驗方法
            1.2.1 組織DNA的提取
            1.2.2 WSSV陽性檢測
            1.2.3 目的片段擴增
            1.2.4 基因克隆與序列分析
    2 結果與分析
        2.1 WSSV陽性檢測結果
        2.2 目的片段的PCR擴增結果
        2.3 序列比對結果
    3 討論
第三章 wsv001、wsv025、wsv045基因克隆及原核表達
    1 wsv001、wsv025、wsv045基因克隆
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗樣品
        1.2 實驗方法
            1.2.1 WSSV病料的制備
            1.2.2 WSSV病毒懸液的制備
            1.2.3 WSSV病毒DNA的提取
            1.2.4 wsv001、wsv025、wsv045目的片段的克隆
        1.3 實驗結果
            1.3.1 WSSV病毒液電鏡圖
            1.3.2 wsv001、wsv025、wsv045目的片段的擴增
    2 wsv001、wsv025、wsv045重組表達載體的構建及蛋白表達
        2.1 實驗方法
            2.1.1 重組表達載體pBAD/gⅢA-001、pBAD/gⅢA-025、pBAD/gⅢA-045 的構建
            2.1.2 重組表達載體pBAD/gⅢA-001、pBAD/gⅢA-025、pBAD/gⅢA-045 的誘導表達
            2.1.3 誘導表達后蛋白的Western-blot檢測
        2.2 實驗結果
            2.2.1 重組載體的構建
            2.2.2 誘導表達及Western-blot結果
    3 討論
第四章 運用RNA干擾技術研究wsv01、wsv025、wsv045基因在WSSV感染過程中的作用
    1 實驗材料與方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
            1.2.1 WSSV病毒懸液的制備
            1.2.2 dsRNA的體外合成
            1.2.3 dsRNA干擾后對凡納濱對蝦感染W(wǎng)SSV的影響
            1.2.4 dsRNA干擾后對凡納濱對蝦感染W(wǎng)SSV后目的基因表達量的測定
            1.2.5 dsRNA干擾后凡納濱對蝦感染W(wǎng)SSV后病毒拷貝數(shù)變化測定
    2 結果與分析
        2.1 dsRNA干擾后凡納濱對蝦的死亡率
        2.2 dsRNA干擾后凡納濱對蝦感染W(wǎng)SSV目的基因相對表達量
        2.3 dsRNA干擾后凡納濱對蝦WSSV病毒拷貝數(shù)
    3 討論
小結
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：4017551