發(fā)布時(shí)間：2020-12-15 18:25

　　第一部分大鼠-小鼠嵌合體異種肺器官的研究研究背景利用人多功能干細(xì)胞培育組織/器官是再生醫(yī)學(xué)的終極目標(biāo)。但是體外器官發(fā)育十分復(fù)雜,通過干細(xì)胞體外分化而獲得完整的器官是非常困難的。目前已有實(shí)驗(yàn)室通過異種囊胚互補(bǔ)技術(shù)在Pdx-/-胰腺缺陷的小鼠體內(nèi)生長(zhǎng)出大鼠PSC來源的胰腺組織。研究目的通過囊胚互補(bǔ)技術(shù),將大鼠iPSCs注射到TTF-1-/-小鼠的囊胚中,在小鼠體內(nèi)獲得互補(bǔ)再生的大鼠iPSCs來源的肺器官,并檢測(cè)和分析大鼠iPSCs在嵌合小鼠肺組織中的嵌合情況,來證明種間肺器官再生的可行性,為最終實(shí)現(xiàn)在豬體內(nèi)培育出人源化的肺器官奠定良好的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法（1）取TTF-1+/-雌性小鼠和TTF-1+/-雄性小鼠交配后第19天的小鼠胎兒,通過H&E染色來觀察其肺發(fā)育的情況。（2）通過堿性磷酸酶（Alkalinephosphatase,AP）染色的方法,鑒定大鼠iPSCs的狀態(tài)。同時(shí),用 anti-C-myc,anti-Oct4,anti-SSEA-1 和 anti-Nanog 四種抗體,來檢測(cè)大鼠iPSCs的潛能性。（3）通過顯微操作技術(shù),將大鼠iPSCs作為供體細(xì)胞注射到TT... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１：囊胚互補(bǔ)再生胰臟??近互生器繼道，Ｉｓｏｔａｎｉ在胸腺缺陷的小鼠??

小鼠和雄性廣＂小鼠交配獲得７ＴＦ－７基因敲除小鼠的囊胚，然后通過囊胚互??補(bǔ)技術(shù)將大鼠ｉＰＳＣｓ注射到７ＴＦ－７基因敲除小鼠的囊胚中，在嵌合體小鼠體內(nèi)??生長(zhǎng)出大鼠ｉＰＳＣｓ來源的肺器官。操作路線圖如圖１－２所示。??７７Ｆ－：Ｚ基因靶向ｓｇＲＮＡ??Ｉ??精子?Ｃａｓ９ｍＲＮＡ?＋?ｓｇＲＮＡ混合物??＼?／ＶＡＡ＾＂ｒＴ??ｒｒ?大鼠丨?ＰＳＣｓ??卵母細(xì)胞?合子?７ＴＦ－１基因缺陷??大鼠－小鼠嵌合體????＼??少?囊胚??Ｘ??ＰＭＳＧ，?ｈＣＧ超數(shù)排卵??圖１－２：實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖??１．２．２．２培養(yǎng)基的配制??（１）小鼠胚胎培養(yǎng)基ＫＳＯＭａａ：?０．５５５０ｇ氯化鈉，０．０１８６ｇ氯化鉀，０．００４７６ｇ磷酸??１９??

（２）?Ｃ５７ＢＬ／６小鼠繁育：４－６周齡的Ｃ５７ＢＬ／６雌鼠和８周齡的Ｃ５７ＢＬ／６雄鼠均??購(gòu)自南京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物房。４－６周齡Ｃ５７ＢＬ／６小鼠將用于超數(shù)排卵獲得卵母細(xì)??胞，用于體外受精。??１．２．２．５?Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ?和?ｓｇＲＮＡ?的構(gòu)建??Ｃａｓ９ｍＲＮＡ?（貨號(hào)：Ａ２９３７８）從?ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ?公司購(gòu)買，ｓｇＲＮＡ?按?ＧｅｎｅＡｒｔ？??ｇＲＮＡ精準(zhǔn)合成試劑盒（貨號(hào)：Ａ２９３７７）說明書中的步驟合成。Ｃａｓ９ｍＲＮＡ和??ｓｇＲＮＡ均保存于－８０°Ｃ超低溫冰箱，受精卵胞質(zhì)注射前將Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ和ｓｇＲＮＡ??用ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ水混合。??１．２．２．６小鼠胚胎的獲取和移植??（１）超數(shù)排卵獲取小鼠胚胎??挑選健康的４－６周齡未成年雌性Ｃ５７Ｂ１／６品系小鼠，于１６：００注射孕馬血清促??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Overexpressing dominant-negative FGFR2-IIIb impedes lung branching morphogenesis in pigs[J]. Qin Chen,Bin Fang,Ying Wang,Chu Li,Xiaoxue Li,Ronggen Wang,Qiang Xiong,Lining Zhang,Yong Jin,Manling Zhang,Xiaorui Liu,Lin Li,Lisha Mou,Rongfeng Li,Haiyuan Yang,Yifan Dai.  Journal of Genetics and Genomics. 2018(03)
[2]Trends of incidence rate and age at diagnosis for cervical cancer in China,from 2000 to 2014[J]. Xueting Li,Rongshou Zheng,Xuemei Li,Haibin Shan,Qi Wu,Yan Wang,Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2017(06)
[3]特發(fā)性肺纖維化藥物治療的研究進(jìn)展[J]. 李雅群,朱慶均,容蓉.  中南藥學(xué). 2017(05)
[4]我國(guó)肺移植的發(fā)展現(xiàn)狀:問題與反思[J]. 王興安,姜格寧.  浙江醫(yī)學(xué). 2016(24)
[5]重視特發(fā)性肺纖維化的并發(fā)癥[J]. 孫輝,李建生,謝洋.  中國(guó)全科醫(yī)學(xué). 2015(26)
[6]塵肺防制的研究進(jìn)展與展望[J]. 陳衛(wèi)紅.  中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2006(09)



本文編號(hào)：2918703