發(fā)布時(shí)間：2025-02-15 11:11

　　 目的:分析和確認(rèn)轉(zhuǎn)錄因子DLX1在骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先,BMP9腺病毒感染C3H10T1/2細(xì)胞,RT-PCR和Western blot檢測(cè)DLX1表達(dá)變化;隨后,利用重組腺病毒技術(shù)分別過表達(dá)DLX1和RNA干擾(RNA Intenference,RNAi)抑制DLX1的表達(dá),并利用堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色、鈣鹽沉積實(shí)驗(yàn)(茜素紅染色),免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)骨鈣素(osteocalcin,OCN)表達(dá)和裸鼠皮下異位成骨實(shí)驗(yàn)分析DLX1對(duì)于BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化的影響。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和Western blot分析DLX1對(duì)于BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞Smad1/5/8信號(hào)途徑的影響。結(jié)果:BMP9可以促進(jìn)C3H10T1/2細(xì)胞中DLX1基因和蛋白表達(dá)水平;過表達(dá)DLX1在體外可進(jìn)一步促進(jìn)BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞的ALP活性、鈣鹽沉積以及OCN的表達(dá),過表達(dá)DLX1亦可促進(jìn)BM...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 細(xì)胞總RNA的提取和RT-PCR
        1.2.3 ALP活性測(cè)定
        1.2.4 鈣鹽沉積實(shí)驗(yàn)
        1.2.5 Western blot
        1.2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)
        1.2.7 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        1.2.8 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和組織化學(xué)染色
        1.2.9 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 BMP9促進(jìn)C3H10T1/2細(xì)胞中DLX1的表達(dá)
    2.2 過表達(dá)DLX1可促進(jìn)BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化
    2.3 RNAi抑制DLX1可減弱BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化
    2.4 DLX1可影響B(tài)MP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞在裸鼠皮下異位成骨
    2.5 DLX1可影響B(tài)MP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8信號(hào)的活化
3 討論



本文編號(hào)：4034218