發(fā)布時(shí)間：2025-03-30 03:47

　　背景：胞外的雙硫鍵HMGB1(高遷移率族蛋白B1)是一種關(guān)鍵的損傷相關(guān)模式分子DAMP,在眾多急慢性疾病中,通過細(xì)胞表面Toll樣受體4(TLR4)介導(dǎo)病理性炎癥：HMGB1-TLR4信號(hào)通路的特異性抑制劑可以選擇性阻斷內(nèi)源性炎癥激活的早期事件,為相關(guān)炎癥性疾病提供新的治療藥物。基于HMGB1-TLR4-TNF-α信號(hào)軸的細(xì)胞高通量篩選發(fā)現(xiàn),第一代HIV蛋白酶抑制劑Saquinavir (SQV)可有效阻斷HMGB1-TLR4激活后的炎癥因子(TNF-a和IL-6)釋放。我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SQV預(yù)處理能顯著減輕肝臟熱缺血再灌注模型(Liver Ischemia/Reperfusion Injury, IR)的肝損傷,而HMGB1-TLR4信號(hào)通路正是Liver IR模型的核心通路之一,同時(shí)鑒定到半胱氨酸蛋白酶V (Cathepsin V,CTSV)是SQV的哺乳動(dòng)物靶點(diǎn)之一。而細(xì)胞實(shí)驗(yàn)與體外重組蛋白實(shí)驗(yàn)均證實(shí)CTSV與TLR4存在相互作用且可被SQV阻斷,CTSV低表達(dá)致使HMGB1-TLR4激活受限,揭示CTSV在TLR4信號(hào)通路中的未知作用,提示SQV通過靶向CTSV而干預(yù)HMGB1-...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖2-1基于Biacore的HMGBl與MD2結(jié)合分析

細(xì)胞釋放炎癥因子[20]�；�于這一理論，我們利用Biacore蛋白相互作用分析技術(shù)，評(píng)估SQV對(duì)HMGB1與MD2結(jié)合的影響。圖2-1示，320秒左右，HMGB1與MD2結(jié)合達(dá)到峰值（黑線）；而添加1mM（SQV:HMGB1=100:1）的SQV對(duì)結(jié)合曲線無影響（藍(lán)線....

圖2-2LPS引起的TLR4受體二聚化被SQV阻斷

八年制博士學(xué)位論文 SQV對(duì)TLR4信號(hào)通路早期事件的影響LPS刺激如前。通過免疫共沉淀技術(shù)（IPHA，IBMyc)觀察TLR4二聚化程度。對(duì)照組中，LPS刺激30分鐘明顯增強(qiáng)了TLR4二聚化，而60分鐘時(shí)二聚化己經(jīng)回復(fù)至初始水平，然而SQV預(yù)處理組中LPS刺激30分鐘....

圖2-3SQV阻斷TLR4募集MyD88

SQV阻斷TLR4募集MyD88。用SQV（30^iM）或OPTIMEM預(yù)處理PM-1巨嘆細(xì)胞1小時(shí)，隨后加入HMGBl（2.5ng/ml）刺激30、60分鐘。用體免疫共沉淀細(xì)胞裂解液，之后免疫印跡檢測(cè)共沉淀蛋白中MyD88和TLR平。研究結(jié)果來自3次獨(dú)立....

圖2-4HMGBl引起的IRAK4難酸化和IRAKI降解被SQV抑制

圖2-3SQV阻斷TLR4募集MyD88。用SQV(30^iM)或OPTIMEM預(yù)處理PMA誘導(dǎo)的人THP-1巨嘆細(xì)胞1小時(shí)，隨后加入HMGBl(2.5ng/ml)刺激30、60分鐘。用兔抗人MyD88抗體免疫共沉淀細(xì)胞裂解液，之后免疫印跡檢測(cè)共沉淀蛋....

本文編號(hào)：4038144