發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 03:31

　　乙型肝炎是一種世界范圍的流行性傳染病,但目前還沒(méi)有有效的治療手段,因此預(yù)防是防治乙型肝炎的重點(diǎn)。血源性抗乙肝表面抗原抗體可用于乙型肝炎的被動(dòng)免疫,防止乙型肝炎的母嬰垂直傳播。但是,血源性抗體的來(lái)源有限且具有潛在的傳染性,給它的應(yīng)用帶來(lái)限制。開(kāi)發(fā)重組人源性抗HBsAg抗體,可以實(shí)現(xiàn)抗體的工程化大規(guī)模生產(chǎn),而且使用安全,可以彌補(bǔ)血源性抗體的缺陷,取代血源性抗體,因此具有良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。 我們將針對(duì)HBsAg preS2區(qū)表位的人源性單鏈抗體基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中表達(dá),表達(dá)量可達(dá)菌體總蛋白的30%,并且目的蛋白在胞內(nèi)形成包涵體。經(jīng)Ni離子金屬螯合親和層析、凝膠層析兩步純化,重組抗體的純度達(dá)到97%。將純化后的單鏈抗體進(jìn)行了復(fù)性。在優(yōu)化復(fù)性方法后,在抗體濃度為0.34mg/mL時(shí),蛋白收率可達(dá)50%。而且復(fù)性后的抗體具有較好HBsAg結(jié)合活性,其親和常數(shù)達(dá)到0.23×10⁸,同時(shí)測(cè)定了一株鼠源單克隆抗體的親和常數(shù),結(jié)果表明單鏈抗體的親和力為一株鼠源單克隆抗體的十六分之一。競(jìng)爭(zhēng)ELISA的結(jié)果表明,我們的單鏈抗體可以抑制一株鼠源單克隆抗體與HBsAg的結(jié)合,抑制... 

【文章來(lái)源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pREp4的限制性圖譜〔2，〕.圖2一3pQE40質(zhì)粒形體圖

.1scFv基因的獲得PCR產(chǎn)物的瓊脂糖電泳結(jié)果如圖4一1所示，在750bp處有較清晰的條帶，而此sFcv基因片段的理論長(zhǎng)度為76b3p，初步確認(rèn)其為ScFv基因的PCR產(chǎn)物。將其切下并膠回收，用所得到的DNA進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。4.1.2重組子的鑒定隨機(jī)挑取3個(gè)轉(zhuǎn)化子，擴(kuò)增后小提質(zhì)粒，用BamHI、HindIH雙酶切，瓊脂糖電泳結(jié)果顯示所有克隆均切出一條750bp左右的片段，與插入目的基因片段的理論長(zhǎng)度(757bp)相符

直接稀釋法透析法復(fù)性方式的比較圖4一9不同方法復(fù)性后的蛋白回收率及相對(duì)比活性Fig.4一9DependeneeoftheproteinreeoveryandrelativesPeeifiebioaetivityonthemethodsofrefolding37


本文編號(hào)：2898792