vMIP-Ⅱ在大腸桿菌表達、純化的條件優(yōu)化及活性鑒定
發(fā)布時間：2020-12-10 13:38
目的：本研究主要對病毒基因來源的人趨化因子同源物vMIP-Ⅱ在原核細胞的表達及純化條件進行優(yōu)化，并對其活性進行鑒定，為大量獲取單鏈vMIP-Ⅱ和將其用于趨化因子受體封閉因子的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 方法：本實驗對已克隆轉(zhuǎn)化的菌株進行誘導(dǎo)，并用Amylose resin親和純化目的蛋白，再經(jīng)SDS-PAGE和Western blot分析純化結(jié)果，以Transwell趨化小室和FN包被的96孔板對vMIP-Ⅱ的生物學(xué)活性進行鑒定。用MTT法檢測vMIP-Ⅱ?qū)ν庵苎獑蝹�核細胞的毒性及對細胞增殖的影響。 結(jié)果：vMIP-Ⅱ／MBP融合蛋白在大腸桿菌中呈高效分泌型表達，SDS-PAEG可見在54KD位置有一明顯的誘導(dǎo)表達條帶。最佳誘導(dǎo)條件為：TB培養(yǎng)基、0.3mmol／L IPTG、28℃誘導(dǎo)4h。免疫印記結(jié)果顯示在54KD位置有一明顯的藍染條帶。該菌的最佳純化條件為：30％的P2緩沖液，MgSO4用量為50ml／g濕菌，濃度為5mmol／L。該法獲得的融合蛋白酶切后得到的單體活性較高，對PBMC趨化、黏附特性的抑制率達50％以上。vMIP-Ⅱ...
【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
MBP融合蛋白親和層析
圖5vMIP一11免疫印記和純化條件的優(yōu)化gSO;對細胞破碎及純化的影響6所示，隨著所用MgS04體積的增加mUg濕菌Mgso;破碎體積水平濃度圖7)，故上清雜蛋白濃度較高可能與，親和層析所得融合蛋白的量較低，有關(guān)。表1不同體積MgSO;不同體積Mgso
PBMC吉姆薩染色形態(tài)觀察
【參考文獻】：
期刊論文
[1]分子伴侶的多重功能[J]. 俞峻,馬康濤. 生物化學(xué)與生物物理進展. 1998(02)
[2]外源基因在大腸桿菌中表達的研究進展[J]. 龍建銀,王會信. 生物化學(xué)與生物物理進展. 1997(02)
本文編號：2908789
【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：63 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
MBP融合蛋白親和層析
圖5vMIP一11免疫印記和純化條件的優(yōu)化gSO;對細胞破碎及純化的影響6所示，隨著所用MgS04體積的增加mUg濕菌Mgso;破碎體積水平濃度圖7)，故上清雜蛋白濃度較高可能與，親和層析所得融合蛋白的量較低，有關(guān)。表1不同體積MgSO;不同體積Mgso
PBMC吉姆薩染色形態(tài)觀察
【參考文獻】：
期刊論文
[1]分子伴侶的多重功能[J]. 俞峻,馬康濤. 生物化學(xué)與生物物理進展. 1998(02)
[2]外源基因在大腸桿菌中表達的研究進展[J]. 龍建銀,王會信. 生物化學(xué)與生物物理進展. 1997(02)
本文編號：2908789
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