發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 00:25

　　目的 利用薄膜法制備攜帶骨膦藥物的載體—脂質(zhì)體，初步探討骨膦脂質(zhì)體誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的作用，為有關(guān)巨噬細(xì)胞的功能研究及臨床相關(guān)疾病的治療，提供新的技術(shù)方法和實(shí)驗(yàn)論據(jù)。 方法 本試驗(yàn)包括(一)骨膦脂質(zhì)體的制備：先利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，將溶解卵磷脂和膽固醇的氯仿，負(fù)壓條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除，在瓶的內(nèi)壁上形成一層薄膜即脂質(zhì)體。然后分別加入不同的液體(PBS液、骨膦液)，低速旋轉(zhuǎn)溶下瓶壁上的脂質(zhì)體，分別制備出空脂質(zhì)體和骨膦脂質(zhì)體。(二)用骨膦脂質(zhì)體在小鼠體外、體內(nèi)不同時(shí)間段分別作用腹腔巨噬細(xì)胞，然后用抗單鏈DNA抗體對凋亡的巨噬細(xì)胞進(jìn)行免疫組化染色，用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)對凋亡的巨噬細(xì)胞DNA進(jìn)行梯狀帶檢測，對比觀察和分析不同時(shí)間巨噬細(xì)胞凋亡的規(guī)律。 結(jié)果 (1) 利用薄膜法制備的脂質(zhì)體能夠包封骨膦藥物，且能夠?qū)⒐庆��?dǎo)入巨噬細(xì)胞并誘導(dǎo)相應(yīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡。(2) 骨膦脂質(zhì)體作用體外的腹腔巨噬細(xì)胞不同時(shí)間段的免疫組化染色。結(jié)果顯示：0小時(shí)未發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞，3小時(shí)可見巨噬細(xì)胞凋亡，凋亡的細(xì)胞核呈現(xiàn)深棕黃色，未凋亡的巨噬細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，凋亡陽性及凋亡陰性的著色特征與胸腺細(xì)胞模型凋亡染色結(jié)果一致。0、3... 

【文章來源】：濰坊醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

空脂質(zhì)體光鏡下觀察脂質(zhì)體呈大小不等的囊狀，個(gè)別多室脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層間隙明顯(、1000)

上從乳白色不透明變?yōu)槿榘咨�澄清透明。用PBS液清洗、離心，使骨嶙脂質(zhì)體再一次懸浮于4而的PBS液中。超聲前的空脂質(zhì)體的鏡下形態(tài)見圖l，骨嶙脂質(zhì)體的鏡下形態(tài)見圖2(高倍鏡 x400)。經(jīng)超聲的空脂質(zhì)體和骨磷脂質(zhì)體的體積明顯變小，鏡下可見不到脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)。圖1空脂質(zhì)體光鏡下觀察脂質(zhì)體呈大小不等的囊狀，個(gè)別多室脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層間隙明顯(、 1000)。

圖2骨嶙脂質(zhì)體呈大小不等的囊狀，從不同的角度觀看個(gè)別多室脂質(zhì)體的磷脂雙層較明顯(x1000)。、小鼠胸腺細(xì)胞凋1雛翅的用抗ssDNA抗體免疫組化染色，地塞米松誘導(dǎo)3小時(shí)和6小時(shí)后凋!叮內(nèi)胸臉胞核呈現(xiàn)深棕黃色，染色質(zhì)濃聚、附邊，細(xì)胞核呈新月狀、帽狀或染色質(zhì)中聚，中陰性細(xì)胞核呈藍(lán)色。O小時(shí)陰性對照組的胸腺細(xì)胞圓而規(guī)整，染色質(zhì)無凝集現(xiàn)，經(jīng)蘇木素復(fù)染細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色。如圖3、圖4。


本文編號：2919173