發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 17:54

　　研究目的:構(gòu)建流感/禽流感及禽流感/流感血凝素融合蛋白的原核表達(dá)載體,并在E.coli JM109中表達(dá),檢測(cè)融合蛋白的生物學(xué)活性。實(shí)驗(yàn)方法:從H1N1流感病毒接種10日齡的雞胚尿囊液中以RT-PCR法獲得特異性H1基因,以H1基因?yàn)槟０褰?jīng)PCR反應(yīng)獲得特異性H1A1及H1A2基因,再?gòu)馁|(zhì)粒pMD18-T/H5中經(jīng)PCR法獲得特異性H5A1及H5A2基因,經(jīng)重疊延伸PCR（SOE PCR）法連接,構(gòu)建重組基因H1A1H5A2及H5A1H1A2,分別以T4 DNA連接酶連接7ZTS原核表達(dá)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2。將二者轉(zhuǎn)染E.coli JM109感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG于37℃下誘導(dǎo)4小時(shí),經(jīng)超聲波破碎收獲包涵體蛋白。以12%SDS-PAGE電泳及Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè),分析表達(dá)產(chǎn)物的抗原性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:測(cè)序結(jié)果顯示獲得的H1A1 H5A2、H5A1H1A2基因序列正確,重組載體7ZTS/H1A1H5A2及7ZTS/H5A1H1A2酶切鑒定結(jié)果正確,12%SDS-PAGE電泳顯示蛋白表達(dá)正確,Western blot檢測(cè)中重組流感/禽... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
第一章 緒論
    1. 流感血凝素蛋白簡(jiǎn)介
    2. 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)
    3. 目標(biāo)蛋白的表達(dá)形式和表達(dá)部位
    4. 7ZTS 表達(dá)載體簡(jiǎn)介
    5.重疊延伸 PCR（SOE PCR）技術(shù)
    6. 表達(dá)融合蛋白的意義
    7. 本課題的設(shè)計(jì)
第二章 儀器和材料
    1. 流感病毒血凝素蛋白全長(zhǎng)基因（H1 基因）
    2. 禽流感病毒血凝素蛋白全長(zhǎng)基因（H5 基因）
    3. 引物
    4.載體與菌株
    5. 主要分子生物學(xué)試劑
    6. 主要生化及化學(xué)試劑
    7. 試劑盒
    8.主要儀器和設(shè)備
第三章 方法
    1. 人流感/禽流感血凝素融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
    2 禽流感/人流感血凝素融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
第四章 結(jié)果
    1.人流感/禽流感血凝素重組蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
    2 禽流感/人流感血凝素融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)
第五章 討論
    1.大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)
    2.本實(shí)驗(yàn) PCR 及 SOE PCR 法獲取目的基因的過(guò)程中的一些問(wèn)題
    3.融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)部位和表達(dá)形式
    4.血凝素蛋白抗原決定簇的位置
    5.表達(dá)條件優(yōu)化
    6. 本實(shí)驗(yàn)對(duì)于研究人/禽流感基因工程亞單位雜合疫苗的重要意義
    7. 本實(shí)驗(yàn)表達(dá)之融合蛋白的其他應(yīng)用價(jià)值
下一步工作
展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
中文摘要
Abstract
致謝
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血凝素蛋白裂解位點(diǎn)對(duì)H5亞型禽流感病毒侵入細(xì)胞的影響[J]. 劉華雷,王志亮,周濱,陳溥言.  中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2006(05)
[2]運(yùn)用重疊PCR技術(shù)構(gòu)建HCV全長(zhǎng)cDNA細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)性突變體[J]. 孫夢(mèng)寧,薛小平,尹文,呂欣,雷迎峰,韋三華,胡興斌,楊敬.  生物技術(shù)通訊. 2006(01)
[3]H5亞型禽流感病毒HA基因的克隆、表達(dá)及其生物學(xué)活性的初步分析[J]. 武山,陳晨,雷霆,曹紅,陳福勇.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2005(06)
[4]2005年6-7月全球重大動(dòng)物疫情綜述[J].   中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2005(08)
[5]PCR-ELISA快速檢測(cè)高致病性禽流感病毒方法的建立[J]. 亢文華,郝俊峰,張仲秋,寧宜寶,趙德明.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2005(06)
[6]禽流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 霍惠玲,王增利,高豐,米振杰.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2005(05)
[7]禽流感病毒血凝素基因的研究進(jìn)展[J]. 楊志剛,陳阿琴,俞頌東,方維煥.  中國(guó)獸醫(yī)科技. 2005(04)
[8]禽流感血凝素基因的原核表達(dá)及其在H9亞型診斷中的應(yīng)用[J]. 張瑞華,金梅林,王貴華,喻正軍,趙思婷,李紅超,譚亞娣,陳煥春.  生物工程學(xué)報(bào). 2005(02)
[9]流感病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 潘南勝.  湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2004(04)
[10]禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表達(dá)核酸疫苗質(zhì)粒的構(gòu)建及其在體外的表達(dá)[J]. 張芳芳,劉光亮,姜永萍,陳化蘭,陳懷濤.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2004(04)



本文編號(hào)：2920543