嵌合型重組HCV cDNA的構建及體外轉錄RNA的感染特性研究
發(fā)布時間：2020-12-25 10:30
丙型肝炎病毒(HCV)是有囊膜的單股正鏈RNA病毒,屬黃病毒科肝炎病毒屬�；蚪M全長約9.6kb,僅含有一個開放讀碼框(ORF),ORF兩側具有與復制和翻譯相關的非編碼區(qū)(UTR)。HCV是丙型肝炎的病原體,急性感染后約75%發(fā)展為慢性肝炎,其中約20%結局為肝硬化或肝功能衰竭,并有可能進一步發(fā)展為肝細胞肝癌。目前全世界有1.7億HCV感染者,HCV感染已經成為全球性的嚴重社會公共衛(wèi)生問題之一。 迄今尚無特異有效的防治HCV感染的方法,疫苗研究也未取得明顯進展。其原因除了HCV本身型別多樣,且高度變異以外,缺乏穩(wěn)定可靠的細胞培養(yǎng)系統(tǒng)和小動物實驗模型,也極大地制約著HCV及其致病機理和防治研究的深入開展。利用傳統(tǒng)方法建立HCV細胞培養(yǎng)模型一直未獲得突破性進展,而體外轉錄制備感染性RNA(感染性轉錄體)技術的建
【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校
【文章頁數】：98 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
各目的基因片段的PCRF1910AmPlifieationofB3US、B3UL、BSUI、BSUll、(A)
載體自身各有l(wèi)個scal位點，而且在酶切鑒定pBSU一TEasy重組子時，已知BSU為反向插入T載體中，使用Seal單酶切，將得到1186bp與429lbp的片段，酶切產物經電泳后可見與預期大小相符的條帶(圖12)。連接后的片段經再次測序，讀框正確，無移碼突變。圖12重組質粒pBSU一AHE一TEasy的酶切鑒定結果F1912RestrietionendonueleasesdigestionofreeombinantPlasmidPBSU一AHE一TEasyl:PBSU一AHE一TEasy/Xhol+Xbal;2:入DNA/EeoRI+HindlllMarker3:DL2000Marker:4:PBSU一AHE一TEasy/Seal52
致p3oll上417obp處Hindlll位點消失，pHFLurtl終長度16163bp，并且在使用Xbal+Seal雙酶切，BamHI與Hindlll分別單酶切時，與p30llutrl酶切結果截然不同(圖13)。圖13重組質粒pHFLutrl與p30llutrl的酶切鑒定結果比較F1913RestrietionendonueleasesdigestionofPlasmidsPHFLutrlandP301lutrlI:P301lutrl/Xbal+Seal(3.4+13.7kb):2:P301]utrl/BamHI(5.2+5.7+6.2kb)3:P30llutrl/HindDI(1.2+1.8+2.1+4+skb);4:DL2000marker(rfomuPtobottom:2000，1000，750，500，250，10ObP)5:入DNA/Hind111Marker(rfomuPtobottom:23136，9416，6557
【參考文獻】：
期刊論文
[1]丙肝病毒全基因組cDNA克隆侵染細胞培養(yǎng)體系的建立[J]. 姚相杰,郭佳,鄭從義,方呈祥,屈三甫,陳震球,李中紅,李信墻,李衛(wèi)云. 科學通報. 2004(10)
[2]HCV 1a/1b型嵌合體能在HepG2細胞內復制與表達[J]. 王宏衛(wèi),趙平,謝南,張珉,朱詩應,戚中田. 中國病毒學. 2003(05)
[3]人胎盤滋養(yǎng)層細胞的分離培養(yǎng)及HCV體外感染試驗[J]. 程勇前,聶青和,周永興,楊華光,李謹革. 第四軍醫(yī)大學學報. 2002(17)
[4]丙型肝炎病毒(HCV)體外培養(yǎng)技術研究進展[J]. 黃鶯,徐德忠. 國外醫(yī)學.病毒學分冊. 2000(05)
[5]人肝癌細胞系7721丙型肝炎病毒體外感染模型的建立[J]. 宋志強,郝飛. 中華傳染病雜志. 1999(04)
本文編號：2937477
【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校
【文章頁數】：98 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
各目的基因片段的PCRF1910AmPlifieationofB3US、B3UL、BSUI、BSUll、(A)
載體自身各有l(wèi)個scal位點，而且在酶切鑒定pBSU一TEasy重組子時，已知BSU為反向插入T載體中，使用Seal單酶切，將得到1186bp與429lbp的片段，酶切產物經電泳后可見與預期大小相符的條帶(圖12)。連接后的片段經再次測序，讀框正確，無移碼突變。圖12重組質粒pBSU一AHE一TEasy的酶切鑒定結果F1912RestrietionendonueleasesdigestionofreeombinantPlasmidPBSU一AHE一TEasyl:PBSU一AHE一TEasy/Xhol+Xbal;2:入DNA/EeoRI+HindlllMarker3:DL2000Marker:4:PBSU一AHE一TEasy/Seal52
致p3oll上417obp處Hindlll位點消失，pHFLurtl終長度16163bp，并且在使用Xbal+Seal雙酶切，BamHI與Hindlll分別單酶切時，與p30llutrl酶切結果截然不同(圖13)。圖13重組質粒pHFLutrl與p30llutrl的酶切鑒定結果比較F1913RestrietionendonueleasesdigestionofPlasmidsPHFLutrlandP301lutrlI:P301lutrl/Xbal+Seal(3.4+13.7kb):2:P301]utrl/BamHI(5.2+5.7+6.2kb)3:P30llutrl/HindDI(1.2+1.8+2.1+4+skb);4:DL2000marker(rfomuPtobottom:2000，1000，750，500，250，10ObP)5:入DNA/Hind111Marker(rfomuPtobottom:23136，9416，6557
【參考文獻】：
期刊論文
[1]丙肝病毒全基因組cDNA克隆侵染細胞培養(yǎng)體系的建立[J]. 姚相杰,郭佳,鄭從義,方呈祥,屈三甫,陳震球,李中紅,李信墻,李衛(wèi)云. 科學通報. 2004(10)
[2]HCV 1a/1b型嵌合體能在HepG2細胞內復制與表達[J]. 王宏衛(wèi),趙平,謝南,張珉,朱詩應,戚中田. 中國病毒學. 2003(05)
[3]人胎盤滋養(yǎng)層細胞的分離培養(yǎng)及HCV體外感染試驗[J]. 程勇前,聶青和,周永興,楊華光,李謹革. 第四軍醫(yī)大學學報. 2002(17)
[4]丙型肝炎病毒(HCV)體外培養(yǎng)技術研究進展[J]. 黃鶯,徐德忠. 國外醫(yī)學.病毒學分冊. 2000(05)
[5]人肝癌細胞系7721丙型肝炎病毒體外感染模型的建立[J]. 宋志強,郝飛. 中華傳染病雜志. 1999(04)
本文編號：2937477
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