發(fā)布時(shí)間：2025-02-07 12:42

　　目的 劉德新等人已通過噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)繞過免疫成功克隆了人抗地高辛單鏈抗體(human single-chain variable fragment of anti-Dig antibody, ADAscFv)，并使其在大腸桿菌中得到可溶性表達(dá)，目前需依據(jù)抗體性質(zhì)的特點(diǎn)進(jìn)行分離與純化。由于不同蛋白質(zhì)的純化無(wú)通用策略，給制備帶來(lái)了較大難度和特殊性，本實(shí)驗(yàn)的目的即通過試用不同的純化方法（鹽析、陰離子交換、凝膠過濾等），探明適合純化ADAscFv的最佳純化方法及條件，為下一步制備診斷Dig中毒的試劑盒和探明ADAscFv對(duì)Dig中毒的拮抗作用等后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法 ①培養(yǎng)大腸桿菌(E.coli)HB2151，進(jìn)行可溶性表達(dá)ADAscFv, 離心制備菌液上清，分別經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）和聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE）對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行活性及表達(dá)量的檢測(cè)。②采用不同飽和度硫酸銨分級(jí)鹽析法（SF）對(duì)上述表達(dá)物進(jìn)行初步分離,分別用ELISA和SDS-PAGE法對(duì)回收的樣品進(jìn)行活性及純度的檢測(cè)，確定硫酸銨的最佳飽和度及適合的溫度、沉淀所需時(shí)間等條件。③...

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
論 文
    前 言
    材 料
    方法與結(jié)果、討論
        第一部分
        第二部分
        第三部分
        第四部分
        第五部分
    結(jié) 論
    參考文獻(xiàn)
綜 述
    正 文
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
致 謝



本文編號(hào)：4030892