發(fā)布時間：2020-11-23 15:49

　　 本研究以綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)新疆流行株基因組DNA為模板,通過PCR擴增30S RPS11基因,對其進行分子特征性分析,并將其抗原表位集中區(qū)進行原核表達,分析重組蛋白免疫原性。結(jié)果表明,30S RPS11基因全長405bp,編碼134個氨基酸,該蛋白是一種受磷酸化調(diào)控的蛋白,含有一個核糖體蛋白S11信號。SDSPAGE結(jié)果顯示,篩選的抗原表位集中區(qū)重組蛋白分子質(zhì)量為29kDa;Western blot分析顯示,該重組蛋白可被MO陽性血清特異性識別,說明其具有良好的反應(yīng)原性;小鼠免疫試驗表明,重組蛋白誘導(dǎo)機體產(chǎn)生的間接血凝抗體效價可達1∶32~1∶64,表明其具有較強的免疫原性。本試驗首次證實MO核糖體蛋白(30SRPS11)具有良好的免疫原性和反應(yīng)原性,為MO血清學(xué)診斷及亞單位疫苗研發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、菌種及試劑
    1.2 總DNA的提取
    1.3 引物設(shè)計與合成
    1.4 MO 30S RPS11基因的PCR擴增、克隆及分子特征分析
    1.5重組表達載體pET-32a （+） -30SRPS11質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 30S RPS11基因的誘導(dǎo)表達及免疫印跡分析
    1.7 30SRPS11重組蛋白的免疫原性研究
2 結(jié)果與分析
    2.1 30S RPS11基因PCR擴增與克隆
    2.2 30S RPS11基因及其編碼蛋白分子特征分析
    2.3 30SRPS11蛋白二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)的預(yù)測
    2.4 重組表達載體pET-32a （+） -30SRPS11的構(gòu)建與鑒定
    2.5 表達產(chǎn)物的SDS-PAGE和Western blot分析
    2.6 重組蛋白的小鼠免疫試驗
3 討論

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