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細胞穿膜肽TAT介導豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp9納米抗體Nb6抗病毒感染的研究

發(fā)布時間:2020-12-03 22:08
  豬繁殖與呼吸綜合癥(PRRS)是一種以豬繁殖障礙和呼吸疾病為特征的病毒性傳染病,是目前造成全球養(yǎng)豬業(yè)巨大經(jīng)濟損失的重要傳染病之一。該病由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起。PRRSV以高變性、免疫抑制、持續(xù)性感染及抗體依賴性增強為特征,現(xiàn)有疫苗的群體保護力較低,尚無有效的抗病毒藥物。PRRSV非結構蛋白Nsp9是RNA依賴的RNA聚合酶,在不同毒株間高度保守,被認為是抗PRRSV藥物的一個重要靶標。在先前的研究中,本實驗室成功制備出一株PRRSV Nsp9特異性納米抗體Nb6,并且證明細胞內(nèi)表達的Nb6可以顯著抑制PRRSV在MARC-145細胞中的復制。然而,由于納米抗體不能有效穿過細胞膜,因此不能進入細胞達到抗病毒的作用。因此,制備安全、有效和無細胞毒性的細胞內(nèi)遞送系統(tǒng)對于提高Nb6的抗病毒活性至關重要。細胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)是一類含有約5-30個氨基酸的短肽,可以通過直接易位或內(nèi)吞作用等方式進入細胞內(nèi),且不會引起細胞毒性。目前,CPPs已經(jīng)被用作向細胞內(nèi)遞送各種貨物的工具,例如質(zhì)粒DNA,siRNA,蛋白質(zhì),病毒,成像劑和... 

【文章來源】:西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:106 頁

【學位級別】:博士

【部分圖文】:

細胞穿膜肽TAT介導豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp9納米抗體Nb6抗病毒感染的研究


PRRSV結構圖(引自(Dokland,2010;MusicandGagnon,2010))

亞基因組,基因組,結構示意圖,非結構蛋白


第一章 文獻綜述1996),Nsp10 是含有鋅指基序的解旋酶(Bautista et al., 2002; Seybert et al., 2005; Seybertet al., 2000),Nsp11 是鳥苷酸特異性核酸內(nèi)切酶(Nedialkova et al., 2009)。目前對于 pp1ab中其它非結構蛋白(Nsp5-8、Nsp12)的功能及結構都尚不清楚,還需進一步的研究。PRRSV 非結構蛋白 Nsp9 與宿主細胞蛋白共同組裝成病毒復制轉(zhuǎn)錄復合體(replicationand transcription complex, RTC),參與病毒 RNA 的復制及亞基因組 mRNA 的轉(zhuǎn)錄與翻譯。同時,Nan 等人發(fā)現(xiàn) PRRSV其它非結構蛋白與 Nsp9 之間發(fā)生互作,形成了復雜的互作網(wǎng)絡(Nan et al., 2018),這可能為 RTC 形成和功能的研究提供了理論基礎。

受體,病毒顆粒


人發(fā)現(xiàn)了一種由 Gp5 的亞基因組 mRNA 編碼的膜錨定蛋白,并證實該 Gp5a 蛋白作為次要結構蛋白被組裝到病毒顆粒中,并且在 PRRSV復制中至關重要(Firth et al., 2011;Johnson et al., 2011; Sun et al., 2013)。此外,Kappes 等人研究發(fā)現(xiàn)非結構蛋白 Nsp2 能夠組裝到多種PRRSV毒株的病毒顆粒中,但其在病毒粒子中的作用尚不清楚(Kappes etal., 2013)。1.1.3 PRRSV 感染與機體免疫應答1.1.3.1 PRRSV 感染相關的受體蛋白豬是 PRRSV目前已知的唯一天然宿主,并且 PRRSV感染嚴格靶向于單核巨噬細胞。PRRSV通過網(wǎng)格蛋白介導的內(nèi)吞作用進入細胞,內(nèi)體酸化膜融合之后,病毒基因組被釋放到細胞質(zhì)中,然后開始它的復制。研究表明,PRRSV進入細胞由許多宿主細胞受體或因子介導,包括硫酸乙酰肝素(Delputte et al., 2002)、波形蛋白(Kim et al., 2006)、CD151(Wu et al., 2014)、豬 CD163(Guo et al., 2014)、唾液酸黏附蛋白(CD169)(Delputteet al., 2007)、DC-SIGN(CD209)(Huang et al., 2009; Pineyro et al., 2016)和 M YH9(Gao etal., 2016)等(圖 1-3)。通過對豬巨噬細胞 cDNA 文庫受體功能的篩選,發(fā)現(xiàn) CD163(清道夫受體半胱氨酸家族成員)是 PRRSV起始感染的關鍵因素。一些 PRRSV非易感細

【參考文獻】:
期刊論文
[1]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul.  World Journal of Virology. 2012(01)



本文編號:2896569

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