發(fā)布時(shí)間：2020-12-08 11:04

　　為篩選與O型FMDV衣殼酸敏感性相關(guān)的位點(diǎn),通過(guò)突變相關(guān)酸敏感性位點(diǎn)以提高衣殼蛋白在Bac-toBac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)量。本研究以牛源O型FMDV ON株為研究對(duì)象開(kāi)展耐酸性毒株的篩選工作,篩選得到存在于Pl上的5個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn)。然后經(jīng)過(guò)耐酸改造,利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)獲得表達(dá)O型FMDV衣殼蛋白的重組桿狀病毒rBac-P12A3C。外源蛋白的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果表明,表達(dá)產(chǎn)物能夠被O型FMDV多克隆抗體識(shí)別。免疫電鏡觀察到了直徑約27nm的正六邊形顆粒。用蛋白樣品rBac-P12A3C對(duì)BALB/c小鼠肌肉注射免疫,通過(guò)液相阻斷ELISA的方法檢測(cè)O型口蹄疫病毒的抗體效價(jià),最后取小鼠脾臟利用ELISPOT的方法檢測(cè)細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ的水平。結(jié)果表明蛋白樣品rBac-P12A3C可以激發(fā)小鼠的體液免疫反應(yīng),同時(shí)還可以很好的激發(fā)小鼠的細(xì)胞免疫反應(yīng)。本研究為后期研制出FMD的基因工程亞單位疫苗奠定了基礎(chǔ)。 

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