托佩克豬SLA-1-632-TPK基因的矯正及重組質(zhì)粒SLA-1-TPK/pMD19-T的構(gòu)建
發(fā)布時(shí)間：2020-12-11 08:08
豬白細(xì)胞抗原（swine leukocyte antigen,SLA）在豬免疫系統(tǒng)中起遞呈抗原作用,對(duì)其展開研究可為豬相關(guān)傳染病的預(yù)防提供依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn),托佩克豬SLA-1-632-TPK基因編碼序列發(fā)生堿基缺失（距離SLA-1-632-TPK基因5′端632bp處丟失1個(gè)堿基"C"）,導(dǎo)致移碼突變。為矯正SLA-1-632-TPK基因,設(shè)計(jì)2對(duì)矯正引物,以原重組質(zhì)粒SLA-1-632-TPK/pMD18-T為模板,利用剪切重疊延伸PCR（splicing overlap extention PCR,SOEPCR）技術(shù)分別擴(kuò)增SLA-1-632-TPK 5′和3′端,之后進(jìn)行拼接,最后擴(kuò)增全序列從而矯正目的基因,并進(jìn)一步連接pMD19-T Simple載體,通過單菌落PCR篩選陽(yáng)性克隆并測(cè)序,并通過GENETYX version 9.0軟件對(duì)所測(cè)序列進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,SOE-PCR成功擴(kuò)增得到5′和3′端片段,大小約為650和590bp,與理論設(shè)計(jì)值大小（648和585bp）接近,經(jīng)過拼接以后,得到全長(zhǎng)約1 200bp,與理論設(shè)計(jì)值1 223bp接近。菌落PCR結(jié)果顯示,矯正基因成功...
【文章來源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2017年06期 第1645-1651頁(yè) 北大核心
【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)
【部分圖文】：
圖２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接結(jié)果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ
中國(guó)畜牧獸醫(yī)４４卷Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′端ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；２，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′端ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，Ｔｈｅ３′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ；２，Ｔｈｅ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ圖１ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′和５′端擴(kuò)增結(jié)果Ｆｉｇ．１Ｔｈｅ３′ｅｎｄａｎｄ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ２．２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′和３′端拼接經(jīng)拼接和ＰＣＲ擴(kuò)增后，１．０％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到一條約１２００ｂｐ的條帶，與理論設(shè)計(jì)值１２２３ｂｐ大小相符（圖２）。圖２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接結(jié)果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ２．３單菌落ＰＣＲ檢測(cè)托佩克豬ＳＬＡ－１－ＴＰＫ插入ｐＭＤ１９－ＴＳｉｍｐｌｅ載體經(jīng)單菌落ＰＣＲ擴(kuò)增后，１．０％瓊脂糖電泳檢測(cè)到一條約１２００ｂｐ的條帶，與理論設(shè)計(jì)值１２２３ｂｐ相符（圖３）。Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１～４，單菌落ＰＣＲ篩選陽(yáng)性克�。停模蹋玻埃埃埃模危粒停幔颍耄澹�；１－４，ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｂｙｃｏｌｏｎｙＰＣＲ圖３單
６期翟曉鑫等：托佩克豬ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的矯正及重組質(zhì)粒ＳＬＡ－１－ＴＰＫ／ｐＭＤ１９－Ｔ的構(gòu)建圖４序列分析托佩克豬ＳＬＡ－１－ＴＰＫ基因矯正情況Ｆｉｇ．４ＳｅｑｕｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－ＴＰＫｇｅｎｅｆｒｏｍＴｏＰｉｇｓｐｉｇ１６４９
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]托佩克種豬(約克夏大白豬)的引進(jìn)與利用[J]. 余文富,王龍欽,付娟林,張似青. 中國(guó)豬業(yè). 2016(04)
[2]利用融合PCR技術(shù)和T載體克隆技術(shù)構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌PhoPR雙組份系統(tǒng)缺失突變載體[J]. 王君,吳芳,柳小玲,梁粟,張培培,章樂,吳江東,曹旭東,張萬江. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2016(03)
[3]中國(guó)2個(gè)地方品系豬SLA-3原核表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)[J]. 茍東洲,戴琳,楊杰,高鳳山. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2015(02)
[4]荷包豬SLA-DRa基因的克隆及序列分析[J]. 姜平,高鳳山,額爾敦木圖. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2015(02)
[5]用改進(jìn)的重疊延伸PCR技術(shù)構(gòu)建三位點(diǎn)突變載體[J]. 郭紫芬,軒貴平,陳方方,張式一. 生物技術(shù)通訊. 2014(02)
[6]豬β2m四聚體前體鏈重組表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)[J]. 劉昌華,劉筏,張晶,喬震,高鳳山. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(04)
[7]豬主要組織相容性復(fù)合體研究進(jìn)展[J]. 馮磊,趙德,高鳳山. 生命科學(xué). 2012(07)
[8]托佩克豬SLA-2與β2m復(fù)合體的構(gòu)建[J]. 陳兆華,周巧妮,劉昌華,劉騰飛,趙德,高鳳山. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(11)
[9]SLA與免疫抗病的研究進(jìn)展[J]. 于輝,李彬,李華,顏其貴. 中國(guó)畜牧雜志. 2009(05)
[10]單菌落PCR法直接快速鑒定重組克隆[J]. 陳書霞,王曉武,房玉林. 微生物學(xué)通報(bào). 2006(03)
碩士論文
[1]巴馬小型豬經(jīng)典SLA-Ⅰ類和Ⅱ類基因克隆及生物信息學(xué)分析[D]. 陳佳佳.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
本文編號(hào)：2910179
【文章來源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2017年06期 第1645-1651頁(yè) 北大核心
【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)
【部分圖文】：
圖２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接結(jié)果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ
中國(guó)畜牧獸醫(yī)４４卷Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′端ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；２，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′端ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，Ｔｈｅ３′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ；２，Ｔｈｅ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ圖１ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′和５′端擴(kuò)增結(jié)果Ｆｉｇ．１Ｔｈｅ３′ｅｎｄａｎｄ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ２．２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′和３′端拼接經(jīng)拼接和ＰＣＲ擴(kuò)增后，１．０％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到一條約１２００ｂｐ的條帶，與理論設(shè)計(jì)值１２２３ｂｐ大小相符（圖２）。圖２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接結(jié)果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ２．３單菌落ＰＣＲ檢測(cè)托佩克豬ＳＬＡ－１－ＴＰＫ插入ｐＭＤ１９－ＴＳｉｍｐｌｅ載體經(jīng)單菌落ＰＣＲ擴(kuò)增后，１．０％瓊脂糖電泳檢測(cè)到一條約１２００ｂｐ的條帶，與理論設(shè)計(jì)值１２２３ｂｐ相符（圖３）。Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１～４，單菌落ＰＣＲ篩選陽(yáng)性克�。停模蹋玻埃埃埃模危粒停幔颍耄澹�；１－４，ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｂｙｃｏｌｏｎｙＰＣＲ圖３單
６期翟曉鑫等：托佩克豬ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的矯正及重組質(zhì)粒ＳＬＡ－１－ＴＰＫ／ｐＭＤ１９－Ｔ的構(gòu)建圖４序列分析托佩克豬ＳＬＡ－１－ＴＰＫ基因矯正情況Ｆｉｇ．４ＳｅｑｕｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－ＴＰＫｇｅｎｅｆｒｏｍＴｏＰｉｇｓｐｉｇ１６４９
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]托佩克種豬(約克夏大白豬)的引進(jìn)與利用[J]. 余文富,王龍欽,付娟林,張似青. 中國(guó)豬業(yè). 2016(04)
[2]利用融合PCR技術(shù)和T載體克隆技術(shù)構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌PhoPR雙組份系統(tǒng)缺失突變載體[J]. 王君,吳芳,柳小玲,梁粟,張培培,章樂,吳江東,曹旭東,張萬江. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2016(03)
[3]中國(guó)2個(gè)地方品系豬SLA-3原核表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)[J]. 茍東洲,戴琳,楊杰,高鳳山. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2015(02)
[4]荷包豬SLA-DRa基因的克隆及序列分析[J]. 姜平,高鳳山,額爾敦木圖. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2015(02)
[5]用改進(jìn)的重疊延伸PCR技術(shù)構(gòu)建三位點(diǎn)突變載體[J]. 郭紫芬,軒貴平,陳方方,張式一. 生物技術(shù)通訊. 2014(02)
[6]豬β2m四聚體前體鏈重組表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)[J]. 劉昌華,劉筏,張晶,喬震,高鳳山. 中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(04)
[7]豬主要組織相容性復(fù)合體研究進(jìn)展[J]. 馮磊,趙德,高鳳山. 生命科學(xué). 2012(07)
[8]托佩克豬SLA-2與β2m復(fù)合體的構(gòu)建[J]. 陳兆華,周巧妮,劉昌華,劉騰飛,趙德,高鳳山. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(11)
[9]SLA與免疫抗病的研究進(jìn)展[J]. 于輝,李彬,李華,顏其貴. 中國(guó)畜牧雜志. 2009(05)
[10]單菌落PCR法直接快速鑒定重組克隆[J]. 陳書霞,王曉武,房玉林. 微生物學(xué)通報(bào). 2006(03)
碩士論文
[1]巴馬小型豬經(jīng)典SLA-Ⅰ類和Ⅱ類基因克隆及生物信息學(xué)分析[D]. 陳佳佳.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
本文編號(hào)：2910179
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