發(fā)布時間：2020-12-15 00:32

　　隨著基因編輯技術的飛速發(fā)展,CRISPR/Cas9技術逐漸成為主流。為了驗證CRISPR/Cas9系統(tǒng)在雞基因組上的切割效率,在雞肌肉生長抑制素（Myostatin,MSTN）基因第1、第2外顯子上各自篩選了5個Cas9靶點,構建p X330-sg RNA表達載體;將GFP質粒電轉入DF-1細胞,通過檢測表達GFP細胞的比例來優(yōu)化電轉程序;將載體用優(yōu)化后的電轉程序電轉入DF-1細胞,培養(yǎng)72 h;最后收集細胞提取基因組,通過T7核酸內切酶Ⅰ（T7EⅠ）酶切試驗,選出具有Cas9切割效率的靶點片段,將該片段連入p MD19-T載體,測序并分析結果。結果表明CRISPR/Cas9系統(tǒng)可以成功對DF-1細胞基因組進行切割并引入突變,其中1號外顯子上4號靶點的突變率為64.3%,2號外顯子上2號靶點的突變率為23.3%。研究表明CRISPR/Cas9系統(tǒng)在DF-1細胞中可以有效切割基因組,為CRISPR/Cas9技術應用于雞的基因組編輯提供科學依據(jù)。 

【文章來源】：中國家禽. 2016年07期 北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1.材料與方法
    1.1試驗材料
    1.2試驗方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 細胞電轉
        1.2.3 總RNA提取及反轉錄
        1.2.4 實時定量PCR
        1.2.5 載體構建
        1.2.6 連接反應
        1.2.7 轉化
        1.2.8 去內毒素質粒提取
        1.2.9 細胞基因組提取
        1.2.10 T7 Endonuclease Ⅰ（T7EⅠ）酶切
2 結果與分析
    2.1 電轉程序選擇
    2.2 Cas9切割效率驗證
3 討論


【參考文獻】：
碩士論文
[1]利用CRISPR/Cpf1系統(tǒng)構建DDX21基因敲除模型及功能初步研究[D]. 魯國濤.中國農(nóng)業(yè)科學院 2019
[2]應用CRISPR/Cas9及超表達技術研究miR-2954和YY1在雞睪丸支持細胞調控精子發(fā)育中的作用[D]. 喬凌云.華中農(nóng)業(yè)大學 2019
[3]AAV-SaCas9-sgRNA腺相關病毒的包裝及其對Balb-c小鼠MSTN基因的敲除[D]. 王娟.河南農(nóng)業(yè)大學 2019
[4]MSTN基因敲除灘羊的制備與評價[D]. 丁毅.西北農(nóng)林科技大學 2019
[5]煙草響應低溫脅迫的生化與分子基礎及TCP基因編輯突變的初步研究[D]. 肖玉潔.湖南農(nóng)業(yè)大學 2018
[6]CRISPR/Cas9介導雞肌肉生長和黑色素合成相關基因敲除研究[D]. 尹亞軍.陜西理工大學 2017
[7]CPED1基因在雞胚胎干細胞向精原干細胞分化過程中的作用[D]. 王飛.揚州大學 2017



本文編號：2917300