發(fā)布時間：2024-06-04 19:14

　　為快速檢測豬圓環(huán)病毒3型(PCV3),根據PCV3全基因組保守區(qū)域設計特異性引物,建立PCV3套式PCR檢測方法,并對采自安徽省部分地區(qū)的528份豬臨床樣品進行檢測。結果顯示,建立的方法僅對PCV3檢測陽性,最低檢測限為1.74×10拷貝/μL,與商品化檢測試劑盒的符合率高;臨床樣品中PCV3總陽性檢出率為20.45%(108/528)。建立的PCV3套式PCR方法可用于PCV3的臨床樣品檢測。

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【部分圖文】：

圖2不同退火溫度擴增結果

圖1重組質粒標準品擴增結果2.3特異性試驗

圖4PCV3套式PCR特異性擴增的結果

圖3一擴模板不同稀釋度進行二擴的擴增結果2.5重復性試驗

圖1重組質粒標準品擴增結果

對套式PCR退火溫度及二擴模板稀釋比例進行篩選及優(yōu)化,結果顯示,當退火溫度為58℃時擴增條帶最清晰(圖2),表明58℃為本方法的最佳退火溫度;二擴模板進行50倍稀釋時擴增出的條帶最清晰且無雜帶(圖3),表明50倍為最佳稀釋倍數。圖2不同退火溫度擴增結果

圖3一擴模板不同稀釋度進行二擴的擴增結果

將PCV3陽性重組質粒標準品按照10-1～10-10稀釋成1.74×109拷貝/μL～1.74×100拷貝/μL共10個系列,作為模板進行套式PCR與普通PCR的靈敏度試驗,結果如圖5。圖5A為套式PCR擴增結果,能夠擴增出PCV3標準品質粒的最大稀釋度為10-9,即最低檢測限為....

本文編號：3989056