發(fā)布時間：2025-03-29 21:50

　　 為建立一種快速檢測牛細(xì)小病毒（BPV）的方法,本研究通過PCR擴(kuò)增BPV VP2基因,構(gòu)建pProHTa-BPV-VP2重組表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化后獲得重組大腸桿菌,通過誘導(dǎo)表達(dá)獲得VP2重組蛋白,將其純化后免疫小鼠（100μg/只）,經(jīng)細(xì)胞融合、克隆和篩選共獲得了5株陽性雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為5G9、2B5、6A3、7E8和2B6。經(jīng)鑒定,其分泌抗體亞型分別為IgG2a、IgG2b、IgM、IgM和IgA。間接免疫熒光結(jié)果顯示,5株單克隆抗體（MAb）與BPV均可發(fā)生特異性反應(yīng)。同時,將純化后的BPV VP2重組蛋白免疫新西蘭兔,制備兔抗BPV VP2多抗。利用制備的2B5作為檢測抗體,BPV VP2多抗作為捕獲抗體,初步建立檢測BPV的雙抗體夾心ELISA方法。該方法的特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示,除BPV外,與牛輪狀病毒、豬偽狂犬病毒、豬傳染性腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、牛病毒性腹瀉病毒均不發(fā)生反應(yīng)。敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法對BPV最低檢出量為3.125×10^2.8TCID50/mL。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于10%。利用該方法對269份臨床豬腹瀉...

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圖1重組質(zhì)粒的酶切鑒定（A）及VP2重1000bpA:M:DL8000DNAMarker;1:pProHTa-BPV-VP2digestedwithSalVP2digestedwithSalI

V的BT細(xì)胞作用后，進(jìn)行IFA鑒定，結(jié)果顯示5株MAb上清均與BPV反應(yīng)，顯示特異性熒光，對照組未見特異性熒光（圖2）。表明5株MAb與BPV均可發(fā)生特異性反應(yīng)。8000bp5000bp3000bp2000bpM123A:M:DL8000DNAMarker;1:pProHTa-B....

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