發(fā)布時(shí)間：2025-05-26 23:05

　　 旨在了解胰島素降解酶(insulin-degrading enzyme,Ide)在豬不同組織中的表達(dá)情況,及其在C2C12成肌細(xì)胞增殖和分化中的作用。本研究利用RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測(cè)了Ide在8月齡雄性小型豬不同組織中的表達(dá);利用siRNA技術(shù)干擾Ide表達(dá),檢測(cè)了Ide在C2C12成肌細(xì)胞增殖、凋亡和分化中的作用,試驗(yàn)分為Ide-siRNA處理組和NC-siRNA(negative control)對(duì)照組,每組3個(gè)重復(fù)。結(jié)果顯示,Ide在豬的不同組織(包括大腦、股四頭肌、股二頭肌、背最長(zhǎng)肌、心、肝、脾、肺、腎和睪丸)中廣泛表達(dá),其中,在股四頭肌、腎和睪丸中表達(dá)量相對(duì)更高。Ide-siRNA轉(zhuǎn)染成肌細(xì)胞48 h后,Ide表達(dá)量極顯著下降(P<0.001)。CCK-8檢測(cè)顯示,干擾Ide表達(dá)促進(jìn)了成肌細(xì)胞的增殖,細(xì)胞周期相關(guān)基因表達(dá)也顯著升高,同時(shí)發(fā)現(xiàn)干擾Ide表達(dá)未引起成肌細(xì)胞凋亡。利用2%馬血清誘導(dǎo)成肌細(xì)胞分化的同時(shí)轉(zhuǎn)染Ide-siRNA以干擾其表達(dá),在分化的第2和5天發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,分化相關(guān)基因Myog、Myhc等在干擾組中的表達(dá)均顯著下降...

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【部分圖文】：

圖1 Ide在小型豬不同組織中的表達(dá)

對(duì)小型豬大腦、股四頭肌、股二頭肌、背最長(zhǎng)肌、心、肝、脾、肺、腎和睪丸10個(gè)組織中IdemRNA和蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn),IdemRNA在小型豬不同組織中均有表達(dá)(圖1A),Westernblotting結(jié)果(圖1B)顯示,IDE蛋白在股四頭肌、腎和睪丸中表達(dá)量高于其....

圖2 Ide-siRNAs干擾效率檢測(cè)

成肌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Ide-si-1和NC-siRNA48h后檢測(cè)成肌細(xì)胞相關(guān)基因Myod、Myog的表達(dá)變化,結(jié)果如圖3所示,RT-qPCR檢測(cè)mRNA相對(duì)表達(dá)量發(fā)現(xiàn),降低Ide表達(dá)后(P<0.001),成肌細(xì)胞相關(guān)基因Myod(P<0.01)和Myog(P<0.05)的表達(dá)顯著....

圖3 干擾Ide 48h后成肌細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)

圖2Ide-siRNAs干擾效率檢測(cè)2.4干擾Ide表達(dá)促進(jìn)成肌細(xì)胞增殖

圖4 干擾Ide對(duì)成肌細(xì)胞增殖的影響

為了解Ide在成肌細(xì)胞分化中的作用,使用2%馬血清誘導(dǎo)細(xì)胞成肌分化的同時(shí)轉(zhuǎn)染Ide-si-1和NC-siRNA,計(jì)為第0天,在第3天再次轉(zhuǎn)染,收集第2(D2)和5天(D5)細(xì)胞,檢測(cè)分化相關(guān)基因的表達(dá)。RT-qPCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,Ide干擾組在分化第2天,隨著Ide表達(dá)....

本文編號(hào)：4047116