發(fā)布時間：2024-06-05 03:35

　　目的:妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠期最常見的糖代謝異常類型,占妊娠高血糖的80-90%,顯著增加孕婦及其子代近期和遠期不良結(jié)局。其致病機制與2型糖尿病類似,即胰島素抵抗(insulin resistance,IR)和胰島β細胞功能減退。機體內(nèi)胰島素主要通過靶器官發(fā)揮生物學(xué)作用,其中肝臟是最主要的靶器官之一。肝臟胰島素抵抗主要表現(xiàn)為胰島素抑制肝臟葡萄糖輸出的能力下降,導(dǎo)致肝糖輸出增多,血糖升高;同時IR還影響脂代謝,引起脂質(zhì)代謝產(chǎn)物的堆積,降低胰島素敏感性,進一步加重IR,主要的病理特征是肝臟胰島素信號通路異常,糖異生和糖原分解增加。近年來的研究發(fā)現(xiàn)非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后都具有一系列重要的調(diào)節(jié)潛能。其中,微小RNA(microRNA,mi RNA)是一類長度在19-24個核苷酸之間的ncRNA,通過與靶基因的3’非翻譯區(qū)結(jié)合來影響mRNA的降解和翻譯抑制�，F(xiàn)階段越來越多的證據(jù)表明,miRNA參與多種病理生理過程,且其異常表達與人類疾病密切相關(guān)。Smad家族是細胞內(nèi)重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子...

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:妊娠期糖尿病胎盤的全轉(zhuǎn)錄組測序表達譜
    1前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 實驗方法和步驟
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 GDM診斷標準
            2.2.3 組織標本的采集
            2.2.4 高通量測序
            2.2.5 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)
            2.2.6 GO和 KEGG富集分析
            2.2.7 競爭性內(nèi)源RNA網(wǎng)絡(luò)
        2.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 非編碼RNA的一般特征
        3.2 差異表達非編碼RNA的一般特征
        3.3 差異表達非編碼RNA的驗證
        3.4 GO和 KEGG富集分析
        3.5 競爭性內(nèi)源RNA網(wǎng)絡(luò)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:GDM孕鼠的肝臟糖脂代謝變化和mi R-889-3p的表達
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 實驗方法和步驟
            2.2.1 妊娠期糖尿病孕鼠模型的構(gòu)建與分組
            2.2.2 腹腔注射葡萄糖耐量試驗
            2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附法測定胰島素水平
            2.2.4 糖代謝相關(guān)指標
            2.2.5 組織標本的采集
            2.2.6 肝臟組織蘇木精-伊紅染色
            2.2.7 肝臟組織油紅O染色
            2.2.8 肝臟組織甘油三酯含量的檢測
            2.2.9 肝臟組織糖原含量的檢測
            2.2.10 熒光原位雜交
            2.2.11 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)
            2.2.12 蛋白質(zhì)免疫印跡法
        2.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 孕鼠體重和糖代謝的變化
        3.2 miR-889-3p在孕鼠胎盤和肝臟組織中的表達
            3.2.1 miR-889-3p在孕鼠胎盤組織中的表達
            3.2.2 miR-889-3p在孕鼠肝臟組織中的表達
        3.3 孕鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的變化
            3.3.1 肝臟組織HE染色結(jié)果
            3.3.2 肝臟組織油紅O染色結(jié)果
        3.4 孕鼠肝臟組織甘油三酯含量的比較
        3.5 孕鼠肝臟組織糖原含量的比較
        3.6 孕鼠肝臟組織糖異生途徑關(guān)鍵酶基因的比較
        3.7 孕鼠肝臟組織胰島素信號通路的比較
            3.7.1 孕鼠肝臟組織IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的 m RNA相對表達量的比較
            3.7.2 孕鼠肝臟組織IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的蛋白表達的比較
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分:mi R-889-3p通過靶向Smad7 調(diào)控GDM肝臟胰島素敏感性和糖代謝
    1前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 細胞株
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 實驗方法和步驟
            2.2.1 妊娠期糖尿病孕鼠模型的構(gòu)建與分組
            2.2.2 組織標本的采集
            2.2.3 熒光素酶報告基因
            2.2.4 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)
            2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡法
            2.2.6 細胞培養(yǎng)
            2.2.7 細胞模型的建立
            2.2.8 細胞轉(zhuǎn)染和分組
            2.2.9 葡萄糖剩余含量的測定
            2.2.10 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)
            2.2.11 蛋白質(zhì)免疫印跡法
            2.2.12 Smad7激動劑的干預(yù)
        2.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 熒光素酶報告基因證實Smad7是mi R-889-3p的靶基因
        3.2 孕鼠肝臟組織Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α表達的比較
            3.2.1 孕鼠肝臟組織Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的 m RNA相對表達量的比較
            3.2.2 孕鼠肝臟組織Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的蛋白表達的比較
        3.3 胰島素抵抗細胞模型的建立
        3.4 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)檢測miR-889-3p
        3.5 miR-889-3p對胰島素抵抗細胞模型葡萄糖剩余量的影響
        3.6 miR-889-3p對肝細胞糖異生關(guān)鍵酶基因表達的影響
        3.7 miR-889-3p對肝細胞胰島素信號通路相關(guān)因子表達的影響
            3.7.1 mi R-889-3p對肝細胞IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的 m RNA相對表達量的影響
            3.7.2 mi R-889-3p對肝細胞IRS-2,PI3K,Akt和 GSK-3β的蛋白表達的影響
        3.8 mi R-889-3p對肝細胞Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α表達的影響
            3.8.1 mi R-889-3p對肝細胞Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的mRNA相對表達量的影響
            3.8.2 mi R-889-3p對肝細胞Smad7,Smad3,Fox O1和PGC-1α的蛋白表達的影響
        3.9 激動Smad7在mi R-889-3p調(diào)控肝細胞胰島素敏感性和糖代謝中的作用
            3.9.1 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)檢測miR-889-3p
            3.9.2 激活Smad7后mi R-889-3p對肝細胞培養(yǎng)基葡萄糖剩余量的影響
            3.9.3 激活Smad7后mi R-889-3p對肝細胞糖異生關(guān)鍵酶基因表達的影響
            3.9.4 激活Smad7后mi R-889-3p對肝細胞胰島素信號通路相關(guān)因子表達的影響
            3.9.5 激活Smad7后mi R-889-3p對肝細胞Smad3,Fox O1和PGC-1α表達的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3989591