發(fā)布時(shí)間：2025-04-22 21:40

　　目的:ErbB3是表皮生長(zhǎng)因子受體家族的成員之一,在多種癌癥組織中表達(dá),Ebp1為ErbB3受體主要的結(jié)合蛋白之一,由人PA2G4基因編碼,已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道Ebp1在人乳腺癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、前列腺癌、以及肝癌等癌癥中具有重要的調(diào)節(jié)作用,但是其在宮頸癌中的作用卻罕見(jiàn)報(bào)道。已有研究發(fā)現(xiàn)Ebp1在宮頸癌組織中高表達(dá),而在癌旁組織中低表達(dá),但Ebp1對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響尚不明確。因此本研究通過(guò)基因干擾技術(shù),初步探討Ebp1對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、和細(xì)胞凋亡等生物學(xué)功能的影響。方法:本研究采用重組慢病毒感染宮頸癌HELA細(xì)胞使Ebp1蛋白低表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分為2組:PA2G4-RNAi病毒組(KD組)和陰性對(duì)照病毒組(NC組)。兩組細(xì)胞感染72 h后用細(xì)胞免疫熒光和蛋白免疫印跡法檢測(cè)KD組和NC組細(xì)胞Ebp1蛋白的表達(dá)情況,Ebp1蛋白表達(dá)顯著降低說(shuō)明轉(zhuǎn)染成功。轉(zhuǎn)染成功后用CCK-8檢測(cè)KD組和NC組細(xì)胞活性,平板克隆和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KD組和NC組細(xì)胞的增殖能力和集落形成能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)KD組和NC組細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡情況,TUNEL法檢測(cè)KD組和NC組細(xì)胞凋亡情況,劃痕實(shí)驗(yàn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)表
第一章 前言
    1.1 宮頸癌流行病學(xué)現(xiàn)狀
    1.2 ErbB3受體的結(jié)構(gòu)和功能
    1.3 Ebp1的表達(dá)和功能
第二章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
第三章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
    3.2 慢病毒感染HELA細(xì)胞
    3.3 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Ebp1蛋白
    3.4 蛋白免疫印跡法檢測(cè)Ebp1蛋白
    3.5 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖
    3.6 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
    3.7 軟瓊脂集落(克隆)形成實(shí)驗(yàn)
    3.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期
    3.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    3.10 TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    3.11 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力
    3.12 Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力
    3.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 重組慢病毒感染HELA細(xì)胞效果監(jiān)測(cè)
    4.2 Ebp1基因沉默對(duì)HELA細(xì)胞增殖的影響
    4.3 Ebp1基因沉默對(duì)細(xì)胞克隆形成能力的影響
    4.4 Ebp1基因沉默對(duì)HELA細(xì)胞周期的影響
    4.5 Ebp1基因沉默對(duì)HELA細(xì)胞凋亡的影響
    4.6 Ebp1基因沉默對(duì)HELA細(xì)胞侵襲的影響
    4.7 Ebp1基因沉默對(duì)HELA細(xì)胞遷移的影響
第五章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄:攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文



本文編號(hào)：4040751