發(fā)布時間：2024-12-11 03:33

　　目的:體外研究大鼠牙囊干細胞成骨分化能力,根據(jù)miR-335成骨相關(guān)基因表達量的改變情況,從而明確miR-335對牙囊干細胞的成骨分化的作用。方法:雙向差速法體外分離培養(yǎng)大鼠牙囊干細胞,進行成骨誘導(dǎo)。用茜素紅染色檢測成骨分化的能力,進而用PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)檢測miR-335的表達,并在瞬時轉(zhuǎn)染miR-335 mimics(pre-miR-335)or inhibitor(anti-miR-335)后成骨誘導(dǎo),用PCR和western-blot的方法檢測成骨能力的改變。結(jié)果雙向差速法培養(yǎng)的牙囊干細胞具有成骨樣細胞分化能力。成骨誘導(dǎo)的牙囊干細胞中miR-335表達降低,轉(zhuǎn)染miR-335 mimics后成骨能力降低,轉(zhuǎn)染miR-335 inhibitor后成骨能力升高。結(jié)論:雙向差速法培養(yǎng)的大鼠牙囊干細胞,可向成骨分化。在體外條件miR-335可以抑制牙囊干細胞的成骨分化。

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
內(nèi)容與方法
    1 實驗材料
        1.1 研究對象
        1.2 主要試劑及配制方法
        1.3 RNA提取及RT-qPCR所需主要試劑
        1.4 western-blot相關(guān)主要試劑及耗材
        1.5 Western-blotting主要試劑的配制
        1.6 本研究所使用的主要儀器
    2 實驗前期準備
        2.1 牙囊干細胞的分離培養(yǎng)
        2.2 實時熒光定量PCR檢測miR-335的表達
        2.3 miR-335瞬時轉(zhuǎn)染
        2.4 Real-timePCR轉(zhuǎn)染效率檢測
        2.5 成骨相關(guān)基因檢測
        2.6 蛋白質(zhì)表達水平的檢測
    3 質(zhì)量控制
    4 統(tǒng)計學(xué)方法
    5 技術(shù)路線
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻
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本文編號：4016120