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牛乳鐵蛋白對伴放線放線桿菌內(nèi)毒素抑制作用的研究

發(fā)布時間:2020-11-21 18:02
   牙周炎是由牙周致病菌引起的常見口腔疾病,導(dǎo)致牙齒支持組織(牙齦、牙周膜、牙槽骨和牙骨質(zhì))的破壞——牙周袋形成和炎癥進行性的附著喪失和牙槽骨吸收。牙周炎分為慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)、侵襲性牙周炎(aggressive periodontitis, AgP)、反映全身疾病的牙周炎(periodontitis asmanifestation of systemic diseases)等多種類型。其中侵襲性牙周炎有家族聚集性,病情進展迅速,常導(dǎo)致牙槽骨的迅速吸收破壞,早期出現(xiàn)牙齒松動和移位,臨床觀察常見患者的牙周組織破壞程度與局部刺激物的量不成正比。大量研究證實,侵襲性牙周炎最主要的致病菌是伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans,Aa),患者的齦下菌斑中分離出伴放線放線桿菌的陽性率可高達90%~100%。 伴放線放線桿菌是革蘭氏陰性短桿菌,可產(chǎn)生許多毒性因子,降低宿主抵抗力,導(dǎo)致牙槽骨吸收,牙周組織破壞,促使附著喪失,形成牙周袋。內(nèi)毒素是伴放線放線桿菌的細(xì)胞壁組分,對牙周組織有很強的抗原性和毒性,能通過誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生和釋放促炎癥細(xì)胞因子而導(dǎo)致炎癥性的骨喪失,是牙周病非常重要的致病因子。 由于侵襲性牙周炎患者存在與菌斑堆積情況不相符的牙周組織破壞,不少學(xué)者報告,單純的刮治術(shù)不能消除侵入到牙周組織中的伴放線放線桿菌,殘存的微生物容易重新定植于牙面,使病變復(fù)發(fā)。因此,臨床上主張全身和局部應(yīng)用抗生素作為機械治療的輔助療法。目前治療侵襲性牙周炎常用的抗生素藥物易產(chǎn)生多種不良反應(yīng)。并且近年來由于抗生素的濫用而導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生,日益威脅著人們身體健康,因此越來越多的學(xué)者致力于研究抑制牙周病原菌的新型藥物。 乳鐵蛋白(Lactoferrin, Lf)是哺乳動物體內(nèi)一種分布廣、功能多的鐵結(jié)合糖蛋白,除了可作為人體營養(yǎng)來源,補充鐵和氨基酸,還具有多種生物學(xué)功能。大量研究證實乳鐵蛋白對多種致病菌具有抑制作用,有廣譜性,且有良好的生物安全性,無毒副作用,長期使用也不會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。 目的:通過體外觀察牛乳鐵蛋白對伴放線放線桿菌生長及內(nèi)毒素產(chǎn)生的抑制作用,初步探討牛乳鐵蛋白對伴放線放線桿菌及其產(chǎn)生內(nèi)毒素的抑制作用機制,為其作為牙周炎臨床抗菌藥物提供理論依據(jù)。 方法:采用液體二倍稀釋法,觀察牛乳鐵蛋白在體外厭氧環(huán)境下對伴放線放線桿菌的抑制作用,并測定最小抑菌濃度(minimal inhibitionconcentration,MIC)。采用顯色基質(zhì)鱟實驗法檢測不同濃度牛乳鐵蛋白(160mg/ml、80mg/ml、40mg/ml、20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml)作用下的伴放線放線桿菌菌液中的內(nèi)毒素量,單純細(xì)菌組作陽性對照,并將所得數(shù)據(jù)通過SPSS統(tǒng)計軟件進行分析。 結(jié)果:牛乳鐵蛋白對伴放線放線桿菌的最小抑菌濃度(MIC)為5mg/ml,在此濃度下細(xì)菌的生長明顯受到抑制。與對照組相比,實驗組內(nèi)毒素含量明顯減少(P0.05)。各實驗組間相比,內(nèi)毒素含量有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),濃度越高,內(nèi)毒素含量越低。 結(jié)論:牛乳鐵蛋白能有效地抑制伴放線放線桿菌的生長,同時對伴放線放線桿菌主要的致病因子——內(nèi)毒素有良好的抑制作用。
【學(xué)位單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2013
【中圖分類】:R781.42
【部分圖文】:

液體培養(yǎng)基,生長情況,牛乳,鐵蛋白


將復(fù)蘇的菌株在 BHI 固體培養(yǎng)基中于 37℃恒溫箱培養(yǎng) 48h,革蘭涂片染色鑒定為 Aa 純培養(yǎng)物。當(dāng)牛乳鐵蛋白濃度為 5mg/ml 時,革蘭染色未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌,肉眼觀察培養(yǎng)后的液體培養(yǎng)基澄清無渾濁,無沉淀,認(rèn)為無細(xì)菌生長(見圖3.1A),牛乳鐵蛋白濃度為 2.5mg/ml 時,液體培養(yǎng)基渾濁,不澄清,認(rèn)為有細(xì)菌生長(見圖 3.1B)。而且將液體培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接種于 BHI 固體培養(yǎng)基中于 37℃恒溫箱中厭氧培養(yǎng) 48h 后,也是在乳鐵蛋白最低濃度為 5mg/ml 時無細(xì)菌生長(圖 3.2),說明Aa 數(shù)量為 1 x 107CFU/ml 時,牛乳鐵蛋白對 Aa 的 MIC 為 5mg/ml。(見表 3.1)

液體培養(yǎng)基,生長情況


不同濃度bLf對Aa生長的影響

標(biāo)準(zhǔn)曲線,鱟試劑,標(biāo)準(zhǔn)曲線,測量值


表 4.1 鱟試劑標(biāo)準(zhǔn)曲線Tab4.1 TAL reagent on endotoxin detection value of standard solution內(nèi)毒素濃度 測量值 1 測量值 2 測量值 3 平均值1 1.393 1.372 1.381 1.3820.5 0.673 0.665 0.669 0.6690.25 0.352 0.359 0.348 0.3530.1 0.135 0.140 0.142 0.1390 0.028 0.028 0.028 0.028
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 張迪亞;李盛來;陳莉麗;;伴放線放線桿菌與牙周病相關(guān)細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

2 吳紅崑,周學(xué)東,莫安春,譚紅,李繼遙;根周細(xì)菌對膠原包被羥磷灰石粘附的體外實驗研究[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2002年04期

3 康萍;印遇龍;黃瑞林;;乳鐵蛋白的抑菌機制[J];中國飼料;2006年15期

4 凌雪萍,龐廣昌,李國強;乳鐵蛋白的最新研究進展[J];食品科學(xué);2003年01期


相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王中強;天然乳鐵蛋白和重組乳鐵蛋白的體內(nèi)、體外抗菌效果及機理研究[D];浙江大學(xué);2004年



本文編號:2893393

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