發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 03:22

　　背景:近年研究顯示lncRNA CASC9在多種腫瘤中表達(dá)升高,發(fā)揮重要的促癌作用。然而,CASC9在口腔鱗癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）中的表達(dá)及其生物學(xué)功能尚不清楚。目的:研究CASC9在OSCC中的表達(dá)和臨床意義,并在體內(nèi)外驗(yàn)證CASC9的生物學(xué)功能。方法:用RT-qPCR檢測35例配對口腔鱗癌和癌旁組織中CASC9的表達(dá)水平。用RT-qPCR檢測OSCC細(xì)胞系和正常口腔黏膜細(xì)胞系中CASC9的表達(dá)水平。用原位雜交檢測具有完整臨床資料和隨訪資料的84例口腔鱗癌患者標(biāo)本中CASC9的表達(dá)水平,分析CASC9的表達(dá)水平與口腔鱗癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性及對OSCC病人生存的影響。免疫組化檢測84例口腔鱗癌患者標(biāo)本中p-AKT與LC3B的蛋白表達(dá)水平,并分別統(tǒng)計(jì)p-AKT與LC3B蛋白表達(dá)水平與CASC9表達(dá)的相關(guān)性。用siRNA沉默CASC9在OSCC細(xì)胞中表達(dá)后,分別用MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞活性、流式細(xì)胞術(shù)和Tunel實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞凋亡、電鏡下觀察自噬,western blotting檢測AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、LC3B、P62、... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

沉默CASC9后抑制SCC15和CAL27細(xì)胞的增殖,促進(jìn)凋亡

44圖 3 沉默 CASC9 后促進(jìn) SCC15 和 CAL27 細(xì)胞自噬。Fig. 3 CASC9 knockdown promotes autophagy in SCC15 and CAL27 cells.a.TEM 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沉默 CASC9 后 SCC15,CAL27 細(xì)胞系中的自噬小體密度增加（低倍 scalebars = 2μm；高倍 scale bars = 1μm）。b.免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)沉默 CASC9 的 SCC15 和 CAL27細(xì)胞中 LC3B 熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，而 P62 熒光強(qiáng)度減弱。c-d.在 SCC15 和 CAL27 細(xì)胞系中敲減CASC9 的表達(dá)水平后，western blotting 檢測到 LC3B Ⅱ/LC3B Ⅰ相對表達(dá)水平升高，但 P62蛋白表達(dá)水平降低 LC3B mRNA 相對表達(dá)升高,P62 mRNA 表達(dá)降低。所有數(shù)據(jù)均代表三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。數(shù)據(jù)以 mean ± SD 展示(n≥3)。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0000。

圖 4 沉默 CASC9 后 AKT/mTOR 信號通路活性降低。Fig. 4 Silencing CASC9 inhibits the activation of the AKT/mTOR signaling pathway.Western Blotting 檢測到沉默 CASC9 的 SCC15 和 CAL27 細(xì)胞系中 p-AKT 和 p-mTOR 的表達(dá)水平較 si-NC 組均顯著降低；而總 AKT 和總 mTOR 蛋白表達(dá)水平無顯著變化。所有數(shù)據(jù)均代表三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。數(shù)據(jù)以 mean ± SD 展示(n≥3)。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0000。


本文編號：2896939