發(fā)布時間：2024-06-14 19:18

　　目的觀察微小RNA122(miR-122)通過靶向調控環(huán)磷腺苷效應元件結合蛋白1(CREB1)對膀胱癌細胞增殖和侵襲能力的影響,并探討其可能的作用通路。方法 Target Scan7.1軟件預測程序顯示,miR-122與CREB1啟動子區(qū)存在連續(xù)的結合位點,雙熒光素酶基因報告實驗結果顯示,在膀胱癌J82細胞中miR-122可靶向負調控CREB1。將J82細胞分為三組,共轉染組采用LipofectamineTM2000轉染miR-122 mimic及CREB1過表達質粒,miR-122 mimic組轉染miR-122 mimic,對照組轉染對照質粒,轉染48 h。采用MTS法和平板克隆實驗檢測細胞增殖能力(分別以增殖OD值和克隆形成數表示),Transwell小室實驗檢測細胞侵襲能力(以穿膜細胞數表示),Western blotting法檢測細胞CREB1及蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、磷酸化m TOR(p-mTOR)蛋白表達。結果與對照組比較,miR-122 mimic組和共轉染組細胞增殖OD值、克隆形成數、穿膜細胞數均降低,且miR...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 miR-122與CREB1的靶向調控關系分析
    1.3 細胞培養(yǎng)及分組轉染
    1.4 轉染效果檢測
    1.5 細胞增殖能力觀察
    1.6 細胞侵襲能力觀察
    1.7 細胞CREB1及Akt/m TOR信號通路相關蛋白表達檢測
    1.8 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 雙熒光素酶基因報告實驗結果
    2.2 各組細胞miR-122、CREB1 mRNA表達比較
    2.3 各組細胞增殖、侵襲能力比較
    2.4 各組細胞CREB1及Akt/m TOR信號通路蛋白表達比較
3 討論



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