發(fā)布時(shí)間：2025-06-04 05:46

　　研究背景 芫花酯甲由瑞香科植物芫花中提取所得，可以抑制P-388，L1210，KB等多種細(xì)胞的增殖，抑制DNA，RNA和蛋白的合成，對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的活性具有顯著的抑制作用，而對(duì)腫瘤壞死因子TNF-α，白細(xì)胞介素IL-1α和IL-1β的生物合成則并無顯著影響。動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，芫花酯甲可抑制C57BL／6和BDF₁小鼠Lewis肺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。 盡管許多研究證實(shí)芫花酯甲可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖以及腫瘤的生長(zhǎng)，但是其具體的作用途徑目前尚未闡明。為此，我們檢測(cè)了芫花酯甲對(duì)黑色素瘤A375細(xì)胞增殖的影響，肯定了其對(duì)黑色素瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，并從細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以及對(duì)蛋白激酶C（PKC）活化作用三個(gè)方面解釋了其可能的作用機(jī)理，并在小鼠黑色素瘤模型上驗(yàn)證了芫花酯甲的抗腫瘤活性，為今后研究芫花酯甲的作用機(jī)理及將其開發(fā)成為新的抗癌藥物打下基礎(chǔ)。 研究方法 我們采用臺(tái)盼藍(lán)染料排斥實(shí)驗(yàn)和CCK-8分析法來檢測(cè)芫花酯甲對(duì)細(xì)胞存活率的影響。通過[³H]-胸腺嘧啶摻入實(shí)驗(yàn)分析其對(duì)細(xì)胞DNA合成的影響。另外，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行碘化丙啶染色，...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
英文所略表
前言
試驗(yàn)材料
    1.細(xì)胞系及菌株
    2.細(xì)胞培養(yǎng)材料
    3.藥品及主要生化試劑
    4.抗體
    5.試劑盒
    6.質(zhì)粒
    7.動(dòng)物
    8.主要儀器
    9.溶液的配制
實(shí)驗(yàn)方法
    1.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
    2.細(xì)胞凍存
    3.生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)
    4.CCK-8法檢測(cè)芫花酯甲對(duì)細(xì)胞活力的影響
    5.³H-TdR摻入法檢測(cè)芫花酯甲對(duì)細(xì)胞DNA合成的影響
    6.碘化丙啶染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)芫花酯甲對(duì)細(xì)胞周期分布的影響
    7.流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定芫花酯甲對(duì)細(xì)胞線粒體膜電勢(shì)的影響
    8.磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測(cè)芫花酯甲對(duì)A375細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用
    9.Bradford法測(cè)定蛋白濃度
    10.電泳及相關(guān)染色
    11.Western Blot測(cè)定細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)變化情況
    12.芫花酯甲對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    13.PKC的提取純化以及活性測(cè)定
    14.質(zhì)粒的提取、純化及轉(zhuǎn)染
    15.芫花酯甲對(duì)于PKCγ的直接激活作用
    16.建立小鼠黑色素瘤模型測(cè)定芫花酯甲對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用
    17.芫花酯甲對(duì)黑色素瘤轉(zhuǎn)移性的影響實(shí)驗(yàn)
    18.數(shù)據(jù)的處理
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.芫花酯甲抑制A375人黑色素瘤細(xì)胞增殖
    2.芫花酯甲對(duì)A375細(xì)胞活力的影響
    3.芫花酯甲對(duì)A375細(xì)胞DNA合成的影響
    4.芫花酯甲對(duì)A375細(xì)胞周期分布的影響
    5.Western blot檢測(cè)芫花酯甲對(duì)A375細(xì)胞周期調(diào)控蛋白表達(dá)的影響
    6.磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    7.芫花酯甲對(duì)A375細(xì)胞線粒體膜電勢(shì)的影響
    8.Western blot檢測(cè)芫花酯甲對(duì)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    9.芫花酯甲急性給藥對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    10.芫花酯甲長(zhǎng)期給藥對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    11.芫花酯甲急性給藥對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶C活性的影響
    12.芫花酯甲對(duì)鼠腦PKC粗提物的活性影響
    13.芫花酯甲對(duì)純化后的鼠腦PKC活性之影響
    14.芫花酯甲對(duì)γ-PKC的激活作用
    15.芫花酯甲對(duì)體內(nèi)黑色素瘤的生長(zhǎng)抑制作用
    16.芫花酯甲對(duì)黑色素瘤轉(zhuǎn)移的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    蛋白激酶Cδ與細(xì)胞凋亡
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：4049406