發(fā)布時間：2018-06-07 02:18

  本文選題：整合素β1 + 啟動子��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 研究背景 皮膚表皮和附件是人體的保護屏障,防止脫水和外界微生物的侵害,為了抵御外界的物理損傷,皮膚經(jīng)歷持續(xù)的自我更新及創(chuàng)面修復(fù),以維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。皮膚之所以能修復(fù)創(chuàng)傷并維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),是因為損傷后具有修復(fù)表皮的表皮干細胞,表皮干細胞存在于人的毛囊,皮脂腺和表皮。表皮干細胞具有強大的增殖潛能,包括自我永生和產(chǎn)生分化的表皮細胞來構(gòu)成皮膚組織。近來科研工作者已經(jīng)揭開表皮干細胞具有強大的增殖和分化特性,并試圖解釋其為何具有如此強大的增殖和分化潛能。 β1整合素在表皮干細胞高表達,被認為是表皮干細胞的標志物之一,大量研究表明,β1整合素在表皮干細胞增殖和分化中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。表皮干細胞主要存在表皮基底層及毛囊隆突部,β1整合素在此高表達,表皮干細胞主要通過β1整合素與基底膜的粘附以及雙向跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)維持其干細胞特性,通過各種方法下調(diào)β1整合素后發(fā)現(xiàn),表皮干細胞走向終末分化。因此通過β1整合素的調(diào)控維持著皮膚的完整性和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。 鈣離子在表皮內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中發(fā)揮著重要作用,在正常皮膚中存在著鈣離子梯度,在表皮基底層細胞鈣離子濃度較低,約0.5mmol/L而在表皮顆粒層鈣離子濃度明顯升高,約1.4mmol/L.大量文獻證實皮膚正常鈣離子梯度影響角質(zhì)化細胞增殖和分化。 Piero C等利用MG-63細胞株(人骨肉瘤細胞株)研究證實β1整合素轉(zhuǎn)錄是由兩個獨立的啟動子區(qū)調(diào)控,揭示了β1整合素轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)模式的復(fù)雜性,而整合素β1的結(jié)構(gòu)特點即:高GC含量,缺少TATA box和CCAAT box,存在多個GC-box,不同于管家基因的啟動子區(qū)結(jié)構(gòu)特點。近端和遠端啟動子在正常或刺激因素作用下都能促進轉(zhuǎn)錄。盡管作為轉(zhuǎn)錄起始的兩個獨立啟動子促進β1整合素基因表達,產(chǎn)生兩種mRNA,但編碼序列卻沒變化,從而具有相同的編碼序列。然而β1整合素在表皮干細胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制到目前為止尚不清楚。 人表皮細胞株(Human adult skin keratinocytos ,HaCaT)來源于正常成人皮膚,是具有完整的表皮分化能力的永生化細胞株。研究表明,將HaCaT移植到裸鼠上,HaCaT可以形成分化上皮組織,表達特異性分化蛋白標志,因此HaCaT可以作為研究人表皮細胞分化調(diào)控的理想模型。 研究目的 本研究應(yīng)用β1整合素啟動子熒光素酶報告基因系統(tǒng),以HaCaT細胞為模型,確定表皮細胞中β1整合素啟動子的高轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域,為進一步研究調(diào)節(jié)表皮干細胞增殖與分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制奠定基礎(chǔ)。 研究方法 1.利用本實驗室前期構(gòu)建的整合素β1啟動子全長、遠端和近端及遠端系列截短載體轉(zhuǎn)染HaCaT細胞,檢測它們在HaCaT中的相對熒光素酶活性,確定β1整合素啟動子中的高活性啟動序列范圍及進行鈣處理后研究其對β1整合素啟動子活性和表達的影響。 2.進行電泳遷移率分析(EMSA)確定并結(jié)合蛋白組學(xué)方法確定調(diào)節(jié)β1整合素啟動子可能的高轉(zhuǎn)錄活性位點及參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子。 研究結(jié)果 1.β1整合素啟動子在表皮細胞高轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域位于遠端啟動子區(qū)的-352bp ~-212bp之間。 2.經(jīng)電泳遷移率分析證明在β1整合素遠端啟動子區(qū)-352bp ~-212bp之間存在特異性轉(zhuǎn)錄因子與其結(jié)合,結(jié)合蛋白組學(xué)方法及轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測系統(tǒng)表明,Sp1和MAZ可能協(xié)同調(diào)節(jié)β1整合素的啟動子活性。 3.鈣影響β1整合素啟動子活性和β1整合素表達。鈣影響表皮細胞遷移可能通過β1整合素。 研究結(jié)論 1.通過對β1整合素全長、遠端與近端啟動子在表皮細胞的相對熒光素酶活性分析證明β1整合素遠端啟動子在表皮細胞β1整合素轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起主要作用。 2.通過對β1整合素遠端啟動子系列缺失載體在表皮細胞的相對熒光素酶活性分析證明β1整合素啟動子在表皮細胞高轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域位于遠端啟動子區(qū)的-352bp ~-212bp之間。 3.鈣調(diào)節(jié)β1整合素啟動子活性和β1整合素表達。鈣調(diào)節(jié)表皮細胞遷移通過β1整合素。
[Abstract]:Background of the study



Skin epidermal cells and accessories are protective barriers to the human body to prevent dehydration and invasion of external microorganisms . In order to protect against external physical damage , the skin is subjected to continuous self - renewal and wound healing to maintain homeostasis in the inner environment . The skin is able to repair the wound and maintain homeostasis in the inner environment . The skin stem cells have a strong proliferative potential , including self - sustaining and differentiated epidermal cells to form skin tissues . Recently scientists have uncovered epidermal stem cells that have strong proliferative and differentiation characteristics and attempt to explain why they have such a strong proliferative and differentiation potential .



The expression of 尾1 integrin in epidermal stem cells is considered to be one of the markers of epidermal stem cells . A large number of studies have shown that 尾1 integrin plays a crucial role in the proliferation and differentiation of epidermal stem cells .



Calcium ion plays an important role in the homeostasis of epidermal homeostasis . There is a calcium ion gradient in the normal skin . The calcium ion concentration in the basal layer of epidermal basal layer is low , and the calcium ion concentration in the epidermal granular layer is obviously increased , about 1.4 mmol / L . A large number of literatures confirm that the normal calcium ion gradient in the skin affects the proliferation and differentiation of keratinocytes .



Piero C絳夊埄鐢∕G-63緇嗚優(yōu)鏍，

本文編號：1989262