發(fā)布時間：2020-11-21 17:07

　　 目的構(gòu)建含小鼠FNDC5基因的綠色熒光蛋白表達載體p EGFP-C3-FNDC5,并初步探索其對C2C12肌細胞的線粒體能量代謝的影響。方法應用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應法從小鼠腓腸肌和心臟組織中擴增出兩端帶有HindⅢ和EcoRⅠ酶切位點的FNDC5編碼片段,經(jīng)回收、純化酶切后,依次連接到質(zhì)粒PM D19-T和p EGFP-C3上,獲得過表達載體后轉(zhuǎn)染至C2C12肌細胞,48 h后以激光共聚焦顯微鏡拍攝線粒體熒光強度,以熒光定量PCR檢測與線粒體能量代謝相關(guān)的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表達情況。結(jié)果 PCR及測序結(jié)果表明:重組質(zhì)粒p EGFP-C3含有FNDC5段,方向及大小正確,過表達FNDC5可以增強線粒體熒光強度,并增加線粒體能量代謝相關(guān)的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表達。結(jié)論成功構(gòu)建了小鼠真核表達載體p EGFP-C3-FNDC5,過表達FNDC5可以增強線粒體能量代謝。
【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1質(zhì)粒、菌株及試劑
    1.2引物設(shè)計
    1.3小鼠FNDC5基因的擴增與純化
    1.4克隆載體PMDT-FNDC5的構(gòu)建及其鑒定
    1.5真核表達載體pEGFP-C3-FNDC5的構(gòu)建與鑒定
    1.6熒光定量PCR檢測
    1.7線粒體含量染色
    1.8統(tǒng)計學處理
2結(jié)果
    2.1FNDC5基因片段的擴增
    2.2重組質(zhì)粒PMDT-FNDC5的篩選鑒定
    2.3重組質(zhì)粒pEGFP-C3-FNDC5的篩選鑒定
    2.4重組質(zhì)粒pEGFP-C3-FNDC5可以過表達FNDC
    2.5過表達FNDC5可以增加線粒體含量
    2.6過表達FNDC5可以增強線粒體能量代謝相關(guān)基因的表達
3結(jié)論

【共引文獻】

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本文編號：2893325