發(fā)布時間：2021-03-12 20:15

  實驗一小鼠噪聲性耳聾模型的建立 目的：建立小鼠噪聲性耳聾模型，為后續(xù)實驗中觀察噪聲后縫隙連接蛋白Cx26和Cx31在小鼠耳蝸外側(cè)壁的表達(dá)變化奠定實驗基礎(chǔ)； 方法：隨機將26只成年雄性Balb/c小鼠分為對照組13只和噪聲組13只。噪聲組給予115dB白噪聲，每天6小時，共2天；噪聲結(jié)束后取耳蝸制備冰凍切片行HE染色；取耳蝸外側(cè)壁組織行透射電鏡觀察；測量聽性腦干反應(yīng)（auditory brainstem response, ABR）；對照組無處理。 結(jié)果：HE染色顯示噪聲暴露后，，外側(cè)壁螺旋韌帶處細(xì)胞胞核染色加深，胞核線條僵硬，胞漿中空泡形成；血管紋未見明顯腫脹，可見較大的細(xì)胞間隙形成；透射電鏡觀察顯示噪聲組小鼠耳蝸外側(cè)壁組織細(xì)胞水腫，胞漿內(nèi)線粒體極度腫脹，大量空泡形成，部分空泡內(nèi)尚可見殘存線粒體結(jié)構(gòu)；噪聲組小鼠的ABR反應(yīng)閾值在噪聲后顯著升高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論：本實驗可以建立穩(wěn)定且可靠的噪聲性耳聾模型，為進(jìn)一步觀察噪聲對耳蝸外側(cè)壁縫隙連接蛋白Cx26和Cx31表達(dá)的影響奠定實驗基礎(chǔ)。 實驗二Connexin26在噪聲性耳聾小鼠耳蝸外側(cè)壁的表達(dá) 目的：觀察Cx26在噪聲性耳聾小鼠耳蝸外側(cè)壁表達(dá)的變化。 方法：取對照組和噪聲組小鼠的耳蝸組織冰凍切片，行免疫組織化學(xué)染色法觀察噪聲前、后耳蝸外側(cè)壁處Cx26表達(dá)的變化；行間接免疫熒光染色觀察噪聲后Cx26細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白——微管蛋白β-Tubulin的形態(tài)學(xué)變化；分別提取對照組和噪聲組小鼠耳蝸外側(cè)壁組織總RNA，實時熒光定量PCR技術(shù)檢測Cx26編碼基因Gjb2mRNA表達(dá)變化。 結(jié)果：對照組和噪聲組小鼠耳蝸螺旋韌帶和血管紋基底細(xì)胞層均可見Cx26表達(dá)；噪聲組小鼠耳蝸外側(cè)壁Cx26表達(dá)較對照組減弱；噪聲后耳蝸外側(cè)壁細(xì)胞微管排列紊亂，局部出現(xiàn)濃集現(xiàn)象；噪聲組小鼠耳蝸外側(cè)壁組織Gjb2的mRNA表達(dá)量低于對照組。 結(jié)論：噪聲引起小鼠耳蝸外側(cè)壁Cx26表達(dá)下調(diào)，Cx26可能參與了噪聲性耳聾的發(fā)病機制。 實驗三Connexin31在噪聲性耳聾小鼠耳蝸外側(cè)壁的表達(dá) 目的：觀察噪聲對耳蝸外側(cè)壁Cx31表達(dá)的影響。 方法：取對照組和噪聲組小鼠的耳蝸冰凍切片，行免疫組織化學(xué)熒光色法觀察耳蝸外側(cè)壁處Cx31表達(dá)的變化；分別提取對照組和噪聲組小鼠蝸外側(cè)壁組織總RNA，實時熒光定量PCR技術(shù)檢測Cx31編碼基因Gjb3RNA表達(dá)變化。 結(jié)果：對照組和噪聲組小鼠耳蝸螺旋韌帶均可見Cx31表達(dá)，血管紋處見陽性表達(dá)，但噪聲組小鼠耳蝸外側(cè)壁免疫熒光染色陽性反應(yīng)較對照組弱；噪聲組小鼠耳蝸外側(cè)壁組織Gjb3的mRNA表達(dá)量明顯低于對照組 結(jié)論：噪聲引起小鼠耳蝸外側(cè)壁Cx31表達(dá)下調(diào)，Cx31可能參與了噪性耳聾的發(fā)病過程。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R764

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 吳喜江,黃在坤,祁光偉;噪聲作業(yè)對生產(chǎn)工人聽力影響的調(diào)查與分析[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);1999年04期

2 楊寅秋;;噪聲對從業(yè)人員聽力的影響及防治[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2011年35期

本文編號：2166085