發(fā)布時間：2025-01-05 20:24

　　 背景:Wnt信號通路在干細(xì)胞的調(diào)控中發(fā)揮重要作用,但是其對于角膜緣干細(xì)胞的調(diào)控作用尚不十分明確。目的:探討Wnt信號通路對角膜緣干細(xì)胞的調(diào)控作用及其在角膜緣干細(xì)胞缺乏癥治療中的療效。方法:大鼠角膜緣組織中依次加入Dispase和Trypsin/EDTA進行消化,將消化后的角膜緣干細(xì)胞懸液接種于3D-Matrigel微環(huán)境中培養(yǎng),實驗組培養(yǎng)體系中加入Wnt信號通路激活劑氯化鋰(500μmol/L),對照組不加氯化鋰,培養(yǎng)第7天q RT-PCR檢測角膜緣干細(xì)胞中p63α、CK12、CEBPδ和Ki67的表達,免疫熒光染色檢測角膜緣干細(xì)胞中β-catenin的表達。采用堿燒傷法建立大鼠角膜緣干細(xì)胞缺乏模型,治療組大鼠結(jié)膜下注射激活了Wnt信號通路的角膜緣干細(xì)胞,對照組大鼠結(jié)膜下注射等量PBS,隨后每天使用裂隙燈觀察,治療后第4天取角膜緣組織進行免疫熒光染色、蘇木精-伊紅染色。結(jié)果與結(jié)論:①角膜緣干細(xì)胞在3D-Matrigel培養(yǎng)微環(huán)境中呈球形聚集生長,對照組角膜緣干細(xì)胞中β-catenin呈陰性,實驗組角膜緣干細(xì)胞中β-catenin在細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)聚集;②q RT-PCR結(jié)果顯示:對照組...

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文題釋義：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 設(shè)計
    1.2 時間及地點
    1.3 材料
        1.3.1 實驗動物
        1.3.2 實驗試劑及儀器
    1.4 實驗方法
        1.4.1 細(xì)胞分離及培養(yǎng)
        1.4.2 實時定量PCR檢測p63α、CK12、Ki-67和CEBPδ基因表達
        1.4.3 免疫熒光染色檢測Wnt信號通路
        1.4.4 克隆形成實驗
        1.4.5 角膜緣干細(xì)胞缺乏癥動物模型的建立及治療
        1.4.6 蘇木精-伊紅染色觀察角膜緣干細(xì)胞缺乏模型大鼠角膜上皮形態(tài)
        1.4.7 石蠟切片免疫熒光染色檢測角膜組織中Wnt信號通路狀態(tài)
    1.5 主要觀察指標(biāo)
    1.6 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果Results
    2.1 大鼠角膜緣干細(xì)胞在3D-Matrigel培養(yǎng)體系中的形態(tài)以及角膜緣干細(xì)胞中β-catenin的表達
    2.2 Wnt信號通路激活對于角膜緣干細(xì)胞干性及增殖能力的影響
    2.3 治療組與對照組角膜緣干細(xì)胞缺乏癥大鼠角膜修復(fù)情況以及形態(tài)學(xué)變化
    2.4治療組與對照組角膜緣干細(xì)胞缺乏癥大鼠角膜組織中β-catenin的表達
3 討論Discussion



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