發(fā)布時(shí)間：2025-03-30 03:34

　　 目的:檢測(cè)微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)組織及人喉癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平,以及其對(duì)喉癌細(xì)胞體外增殖、遷移及侵襲能力的影響,并檢測(cè)miR-4476與轉(zhuǎn)錄因子叉頭框蛋白4(fork head box protein 4,FOXP4)的相關(guān)性及可能的結(jié)合位點(diǎn)。方法:應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)LSCC組織及其相應(yīng)癌旁正常組織中FOXP4 mRNA和蛋白的表達(dá)情況。應(yīng)用在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)與FOXP4有調(diào)控作用的miRNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)miR-4476在LSCC組織與其相應(yīng)癌旁正常組織及4種人喉癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,并檢測(cè)其與FOXP4表達(dá)的相關(guān)性。采用染色體免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)FOXP4與miR-4476啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合情況。將pcDNA3.1-FOXP4與報(bào)告基因載體pGL3-miR-4476啟動(dòng)子區(qū)共轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞中,通過檢測(cè)熒光素酶報(bào)告基因熒光信號(hào)活性分析FOXP4對(duì)miR-4476啟動(dòng)子區(qū)的影響。將miR-4476模擬物及抑制物分別轉(zhuǎn)染人...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞與主要試劑
    1.2 病理標(biāo)本與臨床資料
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)LSCC組織中FOXP4 mRNA表達(dá)
    1.5 免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)LSCC組織中FOXP4蛋白表達(dá)
    1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)LSCC組織和喉癌細(xì)胞系中miR-4476的表達(dá)水平
    1.7 pcDNA3.1-FOXP4和si-FOXP4分別轉(zhuǎn)染TU177細(xì)胞
    1.8 染色質(zhì)免疫沉淀-PCR檢測(cè)FOXP4與miR-4476啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合情況
    1.9 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析FOXP4對(duì)miR-4476啟動(dòng)子區(qū)的影響
    1.10 miR-4476 mimics或inhibitor轉(zhuǎn)染喉癌細(xì)胞
    1.11 MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-4476對(duì)喉癌細(xì)胞增殖能力的影響
    1.12 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-4476對(duì)喉癌細(xì)胞克隆形成能力的影響
    1.13 Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-4476對(duì)喉癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響
    1.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié) 果
    2.1 LSCC中FOXP4 mRNA和蛋白表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
    2.2 LSCC中miR-4476表達(dá)及其與臨床病理資料的關(guān)系
    2.3 si-FOXP4或pcDNA3.1-FOXP4轉(zhuǎn)染TU177細(xì)胞后FOXP4的表達(dá)水平
    2.4 FOXP4與miR-4476表達(dá)的相關(guān)性
    2.5 FOXP4與miR-4476啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合
    2.6 喉癌細(xì)胞中miR-4476表達(dá)及miR-4476模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染效率
    2.7 miR-4476表達(dá)上調(diào)及下調(diào)對(duì)細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的影響
3 討 論



本文編號(hào)：4038128