發(fā)布時(shí)間：2025-06-21 02:46

　　炎癥性腸病(IBD)是一種常見的自身免疫功能紊亂疾病,其發(fā)病機(jī)制尚未研究清楚,現(xiàn)有的治療手段很難將其完全根除。近年來發(fā)現(xiàn)一類長度約為21-25個(gè)核苷酸的非編碼單鏈微小核糖核酸(microRNA, miRNA)在IBD發(fā)生發(fā)展過程中扮演著極其重要的角色,提示這種新型的微小核糖核酸可望作為藥物作用靶點(diǎn)或潛在的核酸藥物應(yīng)用于IBD的治療。 本論文中,我們用三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)小鼠炎癥性腸病來模擬人的炎癥性腸病——克羅恩病,研究miR-16作為潛在核酸藥物對IBD的治療功效。首先,我們研究了miR-16的可能作用靶點(diǎn)。腫瘤壞死因子(TNF-a)和白細(xì)胞介素12,23所共有的亞基IL-12p40中富含AU元件(AU-rich element,AREs)的3’端非編碼區(qū)(3'-UTR)分別被構(gòu)建到熒光素酶表達(dá)載體中。我們通過熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)研究了miR-16和TNF-α3'-UTR的結(jié)合能力以及miR-16和IL-12p403’-UTR的結(jié)合能力。另外,通過向活化的腹腔巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)入miR-16的前體或抑制劑,研究miR-16對TNF-a和IL-12p40這兩種分泌蛋白的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫及名詞對照
摘要
Abstract
綜述部分
    一、炎癥性腸病概述
        1.1 炎癥性腸病簡介
        1.2 炎癥性腸病的臨床癥狀
        1.3 炎癥性腸病的致病機(jī)理
        1.4 炎癥性腸病的治療現(xiàn)狀
        1.5 炎癥性腸病的動(dòng)物模型
    二、microRNA 概述
        2.1 miRNA 簡介
        2.2 miRNA與免疫應(yīng)答
        2.3 miRNA與炎癥性腸病
    三、細(xì)胞因子在炎癥性腸病中的作用
        3.1 細(xì)胞因子概述
        3.2 細(xì)胞因子與IBD
        3.3 細(xì)胞因子的調(diào)控
    參考文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)部分
    一、引言
    二、實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)材料
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建
            3.1.1 重組熒光素酶報(bào)告載體構(gòu)建
            3.1.2 突變熒光素酶報(bào)告載體構(gòu)建
        3.2 細(xì)胞內(nèi)熒光素酶實(shí)驗(yàn)
            3.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
            3.2.2 Luciferase測定
            3.2.3 p-gal測定
        3.3 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的提取
        3.4 ELISA檢測促炎因子表達(dá)水平
        3.5 給藥載體的合成
        3.6 免疫熒光
        3.7 TNBS小鼠腸炎模型構(gòu)建
        3.8 結(jié)腸組織中基因表達(dá)水平的檢測
        3.9 TNBS小鼠腸炎模型的治療
        3.10 病理分析
    四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論
        4.1 靶點(diǎn)預(yù)測
        4.2 體外靶點(diǎn)驗(yàn)證
        4.3 TNBS小鼠腸炎模型構(gòu)建
        4.4 G-LMWC/pre miR-16特異性靶向結(jié)腸巨噬細(xì)胞
        4.5 miR-16用于TNBS誘導(dǎo)小鼠炎癥性腸病的治療
            4.5.1 結(jié)腸組織中因子mRNA水平的變化
            4.5.2 ELISA以及免疫熒光結(jié)果
            4.5.3 療效相關(guān)指標(biāo)
            4.5.4 HE病理切片結(jié)果
            4.5.5 一系列炎癥因子表達(dá)水平變化
    五、小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4051794