發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 15:25

　　 胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)具有降低血糖、減輕體重、心血管受益,改善β細(xì)胞等多種生理功能,在治療2型糖尿病和肥胖癥方面是最具潛力的一類藥物。然而,天然的GLP-1易被DPP-IV降解、腎臟濾除、血液中酶降解,在體內(nèi)半衰期不足2 min。因此,為了給患者提供更多的選擇,開發(fā)長效或口服的胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物已經(jīng)成為熱門的研究方向。本研究設(shè)計(jì)合成了胰高血糖素樣肽-1與人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。其結(jié)構(gòu)是把天然GLP-1的第八位丙氨酸突變成甘氨酸或氨基異丁酸,并在C端或第26位賴氨酸側(cè)鏈增加Cys作為偶聯(lián)人血清白蛋白的中介。采用Fmoc固相合成制備化合物,DTNP修飾多肽鏈形成新的二硫鍵,經(jīng)HPLC純化,質(zhì)譜鑒定與理論值一致。與白蛋白定向偶聯(lián)后,SDS-PAGE分析表明偶聯(lián)率較高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,化合物2-HSA(GLP-1(7-37)(Ala8Gly)-Ala-Ala-Cys-HSA)降糖效果達(dá)到72 h,化合物5-HSA(GLP-1(7-37)(Ala8Aib)-Cys-HSA)降糖療效長達(dá)1周,在正常小鼠和2型糖尿病模型大鼠中均具有良好的降糖活性,同時(shí)胰島素分泌顯著提高,有望一周注射一次應(yīng)用于治療2型糖尿病。為了提高患者依從性,本文對口服GLP-1類似物進(jìn)行了初步研究。本研究通過生物信息學(xué)分析,將利拉魯肽第8位和第30、33、34、35位氨基酸進(jìn)行突變,設(shè)計(jì)了3個(gè)GLP-1類似物。采用Fmoc固相合成制備類似物,HPLC分析純化,質(zhì)譜鑒定結(jié)果均與理論值一致。隨后,分別加入10 mM化合物XLCA、100 mM的SNAC作為輔助滲透劑,分別在胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶中進(jìn)行水解實(shí)驗(yàn)。質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明,加100 mM的SNAC在30 min內(nèi)能抵抗胰蛋白酶水解類似物1,而加10 mM化合物XLCA抵抗糜蛋白酶和胰蛋白酶水解作用在大多數(shù)情況下是明顯優(yōu)于SNAC的。類似物1(GLP-1(7-37)(8Aib:26Kε:γGlu-C16))在加4 mM化合物XLCA的情況下在糜蛋白酶、胰蛋白酶中37℃水解24 h仍有大部分存在,有望制成腸溶制劑用于口服給藥。
【學(xué)位單位】：湖南理工學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R96;TQ460.6
【部分圖文】：

南理工學(xué)院碩士學(xué)位論文 第1章 緒交酯-co-乙交酯，這種材料不僅有著很好的生物相容性，還能在注射部位大大的延緩釋放，半衰期達(dá)到 4 d，在 2012 年被 FDA 批準(zhǔn)上市。艾塞那肽-QW 以 2 mg/周劑量注射一次治療，可以使糖化血紅蛋白 HbA1c 減少 1.3～1.9%，體重超過 30 周減少 2.7 kg，血糖調(diào)節(jié)相比普通的艾塞那肽更加有效，相比艾塞那肽明顯減少消化道癥狀[65-67

Efpeglenatide Sanofi PhsaeⅢSubcutaneousinjectionWeeklyITCA 650 Intarcia PhsaeⅢSubcutaneouspumpOnce a yearCJC-1131-PC Conjuchem PhsaeⅡSubcutaneousinjectionWeeklyGlymera PHSAeBio PhsaeⅡSubcutaneousinjectionWeeklyTTP273/ TTP054 TransTech PhsaeⅡ Oral Daily（1）Semaglutide(索馬魯肽口服)：為了提高患者順應(yīng)性，諾和諾德運(yùn)用了 Eligen系統(tǒng)開發(fā)了口服制劑，其中最重要的成分是輔助促滲劑 N-[8-(2-hydroxybenzoyl) amprylate (SNAC)，通過與多肽類藥物之間通過非共價(jià)結(jié)合，增加脂溶性和通透性從多肽類藥物的被動(dòng)吸收，同時(shí)可以減少多肽類藥物吸收轉(zhuǎn)運(yùn)過程的酶水解失活[86]數(shù)據(jù)表明，索馬魯肽每日口服 40 mg 的療效和每周 1 mg 的注射給藥療效一致，目實(shí)驗(yàn)接近完成[87]。

用 1 M 鹽酸調(diào) pH 至 6.8，加水定容至 100 mL，用棕色瓶 4 ℃保存。（12）1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）濃縮膠緩沖液：稱取 18.15 g Tris-HCl，加 80 mL 溶解，用 1 M 鹽酸調(diào) pH 至 8.8，加水定容至 100 mL，用棕色瓶 4 ℃保存。（13）染色液：稱取 1 g 考馬斯亮藍(lán) R-250 至 1 L 燒杯中，加 250 mL 的異丙醇攪溶解，再加入 100 mL 冰醋酸、650 mL 水?dāng)嚢杈鶆�，過濾，室溫保存。（14）脫色液：分別量取 100 mL 醋酸、50 mL 乙醇、850 mL 水至 1 L 燒杯混勻。2.2 實(shí)驗(yàn)方法2.2.1 目的多肽設(shè)計(jì)由于天然 GLP-1 容易被 DPP-IV 酶水解、腎臟濾除，半衰期不足 2 min。因此，為抵抗 DPP-IV 酶水解，把天然 GLP-1 的第八位丙氨酸突變成甘氨酸或氨基異丁酸，同時(shí)了減少腎臟濾除，增大分子量，就在 C 端或第 26 位賴氨酸側(cè)鏈增加 Cys 作為偶聯(lián)人血白蛋白的中介（如圖 2-1 所示）。本文采用化學(xué)合成法制備胰高血糖素樣肽-1 與人血清蛋白（HSA）的融合蛋白。
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本文編號：2868756