發(fā)布時間：2020-12-08 16:06

　　為了從深海來源的微生物中尋找發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤活性的次級代謝產(chǎn)物,我們對17株從中國海洋微生物菌種保藏中心（MCCC）申請得到的深海菌株,分別用9種不同的液體培養(yǎng)基與3種固體培養(yǎng)基,進行小規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。發(fā)酵物用乙酸乙酯萃取三遍,濃縮得到粗浸膏。以人宮頸癌細胞（Hela-S3）,胰腺癌細胞（PANC-1）,肝癌細胞（Bel-7402）,膀胱癌細胞（BIU-87）,食管癌細胞（ECA-109）等5種腫瘤細胞為模型,使用MTT法對各小規(guī)模發(fā)酵粗浸膏進行抗腫瘤活性檢測。結(jié)合MTT檢測結(jié)果,薄層色譜分析與文獻數(shù)據(jù),確定廈門鏈霉菌Streptomyces xiamenensis MCCC 1A01570和擬諾卡氏菌Nocardiopsis sp.MCCC 1A03323為目標菌株,分別用A3和A5兩種培養(yǎng)基經(jīng)行40L的大規(guī)模發(fā)酵。大約兩周后,將發(fā)酵液離心棄去菌絲體,發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取三次,合并濃縮得到粗浸膏。利用ODS反相色譜柱,硅膠色譜柱,葡聚糖凝膠柱Sephadex LH-20,高效液相色譜等分離手段進行化合物的分離純化。通過詳細分析化合物的質(zhì)譜數(shù)據(jù),核磁數(shù)據(jù)等理化數(shù)據(jù),結(jié)合文獻確定化合物的結(jié)構(gòu)... 

【文章來源】：廣東藥科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

A01570（上）和1A00323（下）粗提物TLC分析結(jié)果

圖 3-1 1A01570 放線菌化合物分離流程圖.2.3 細胞培養(yǎng)和雙熒光素酶報告基因試驗核受體是一種配體依賴性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，廣泛存在于多細胞生物的胞漿及胞核內(nèi)，與相應(yīng)配體和相關(guān)調(diào)節(jié)因子溝通作用，調(diào)控基因表達，從而在生物體新陳代謝，生長發(fā)育，細胞分化等上發(fā)揮重要作用。核受體家族成員眾多，視醇 X 受體（RXR ）是其中重要的一員，其在調(diào)控肺癌，乳腺癌，肝癌和前列癌等癌細胞的增殖和凋亡中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。除此，靶向 RXR 的專利藥argretin 在 1999 年被 FDA 批準用于治療皮膚 T 淋巴細胞瘤。基于以上的理論基，該實驗設(shè)計了核受體 RXR 的報告基因篩選模型：RXR 促進活性和核受體XR 競爭性結(jié)合活性。該實驗的目的是采用雙報告基因的方法檢測化合物是否影響 RXR 的轉(zhuǎn)錄活性，并初步探討化合物是否可能存在與 RXR 結(jié)合的作。本研究采用的是螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase, FL）報告基因和海腎熒素酶（Rellina luciferase, RL）報告基因組成的雙螢光素酶報告基因（Dualciferasereporter,DLR）檢測系統(tǒng)。RL 報告基因作為內(nèi)對照，使 FL 報告基因的

廣東藥科大學碩士研究生學位論文體存在競爭性促進作用。兩者同時存在時，且隨著化合物 2，3，13 的濃度增加，對 RXR 受體的促進作用越弱，為 RXR 受體的部分激動劑。化合物 4 則表現(xiàn)為非競爭性促進作用，隨著濃度增加，對 RXR 受體促進作用越強。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]一株地衣內(nèi)生細菌的代謝產(chǎn)物[J]. 范琳,魏曉華.  中國抗生素雜志. 2016(07)
[2]酸藤果化學成分研究[J]. 楊林軍,何明珍,黃文平,謝彥云,王琦,李艷,李志峰,馮育林,楊世林.  中國藥學雜志. 2016(14)



本文編號：2905332