發(fā)布時間：2024-05-12 19:13

　　目的為避免西尼羅病毒(WNV)研究中活病毒所帶來的安全隱患,建立WNV的假病毒報告系統(tǒng),用于抗WNV藥物的篩選。方法構建含有海蜃熒光素酶報告基因的WNV復制子重組質粒prWNV-Rluc及表達WNV結構蛋白C、M和E的重組質粒pcDNA3.1-CME,并共轉染293T細胞,72 h后獲取含有假病毒的培養(yǎng)上清。結果用上清感染BHK21細胞后,BHK21細胞產生熒光,且熒光強度與感染細胞的假病毒量呈量效關系。Western印跡法實驗檢測到感染的BHK21細胞表達WNV NS1蛋白,證實上清中為WN假病毒。中和實驗顯示WNV中和性抗體能有效阻斷WN假病毒對BHK21細胞的感染。結論建立了WNV的假病毒報告系統(tǒng),規(guī)避了生物安全3級實驗室(BSL-3)操作,可用于抗WNV藥物的篩選。

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【部分圖文】：

圖2WN假病毒上清對BHK21細胞的感染力檢測

重組質粒prWNV-Rluc和pcDNA3.1-CME共轉染293T細胞后不同時間段收取培養(yǎng)上清，10倍稀釋后，感染BHK21細胞，48h后進行熒光素酶的檢測。繪制動力學曲線，結果顯示（圖3），轉染后24～72h，假病毒的感染力呈上升趨勢，72～96h處于平臺期，96h后....

圖3西尼羅（WN）假病毒復制動力學

NS1是WNV的非結構蛋白，WNV感染宿主細胞后，病毒基因組在細胞內多輪復制，產生大量的非結構蛋白。為進一步驗證獲取的上清的確為WN假病毒，裂解上清感染后的BHK21細胞，用特異性的抗WNVNS1單抗進行檢測。結果顯示（圖4），與對照細胞相比，上清感染的BHK21細胞內可檢測到....

圖4Western印跡法檢測WNVNS1蛋白的表達

圖3西尼羅（WN）假病毒復制動力學2.5抗體中和實驗

圖5抗體中和實驗檢測結果

WNV屬于黃病毒屬，可引起人畜共患病，嚴重可危及生命。隨著WNV感染流行趨于全球化，中國存在輸入風險。目前，尚無批準上市的疫苗以及藥物用于人感染WNV的預防和治療。因此，針對WNV的藥物研發(fā)極有必要。中和實驗是評價抗體類藥物抗病毒作用的重要方法，但利用活病毒進行中和實驗需要生物安....

本文編號：3971771